酶标记的Ⅱ抗40～50μl，室温静置1h，或37℃1h12、PBS冲洗23次，每次5mi
13、滴加SP（链霉亲和素过氧化物酶），室温或37℃孵育30mi
1h14、PBS冲洗23次，每次5mi
15、显色：DAB显色510mi
，在显微镜下掌握染色程度（胞浆呈棕色者判定为阳性细胞）
（显色剂的配置：在1ml水中加1滴显色剂A，摇匀，然后加1滴显色剂B，摇匀，再加1滴显色剂C，摇匀）（A：DABB：H2O2C：磷酸缓冲液）
2华中科技大学同济医学院
f免疫组化技术
业精于勤而荒于嬉行成于思而毁于随
16、自来水冲洗10分钟终止反应17、复染：苏木精复染2mi
，盐酸酒精分化18、自来水冲洗1015mi
19、常规脱水、透明、封片（用中性树胶滴在组织旁边，再用盖玻片盖上）、镜检
③结果分析：每张切片选择5个高倍镜视野（400X），应用图像分析系统进行定量灰度扫描后进行分析。
试剂、设备：
1、PBS：001M磷酸盐缓冲液pH74配制取NaCl8g，KCl02g，Na2HPO412H2O363g或Na2HPO4144g，KH2PO4024g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至74，加水定容至1L，常温保存备用。
2、固定液：4多聚甲醛磷酸盐缓冲液pH74配制a01M磷酸盐缓冲液：取A液400ml与B液80ml混合后，调pH于74，再定容至500mlA液：01molLNa2HPO4（Na2HPO412H2O358g加水定容至1000ml）B液：01molLNaH2PO4（NaH2PO42H2O156g加水定容至1000ml）b4多聚甲醛磷酸盐缓冲液：取20g多聚甲醛溶于500ml01M磷酸盐缓冲液中，加热并搅拌约23h后溶解
3、梯度酒精：100、95、80、70、50
4、二甲苯
5、包埋剂：石蜡
6、防脱剂：多聚赖氨酸（PLL5g蒸馏水1000ml）、APES（3氨丙基3乙氧基甲硅烷）
7、抗原修复液：001M枸橼酸缓冲液（PH60），或001M柠檬酸盐缓冲液（pH60）配制取A液8ml与B液42ml混合后加水至400ml，调pH于60，再定容至500mlA液：01molL柠檬酸（C6H8O7H2O2101g加水定容至1000ml）B液：01molL柠檬酸钠（Na3C6H5O72H2O2941g加水定容至1000ml）
8、SP超敏免疫组化试剂盒（包括试剂A、B、C、D）试剂A阻断剂：3甲醇H2O2溶液（30H2O2和80甲醇溶液配制）试剂B封闭液：正常非免疫动物血清试剂C二抗（辣根过氧化物酶标记）试剂DSP（链霉亲和素过氧化物酶）
9、一抗（特异结合底物）
10、显色剂：DAB试剂盒、苏木素染液
11、封固液：中性树胶，或50缓冲甘油，或液体石蜡等
12、恒温箱（水浴锅）、冰箱、切片机、载玻片和盖玻片、高压锅或微波炉、染色缸、显微镜、计算机图像分析系统
r