3华中科技大学同济医学院
f免疫组化技术
业精于勤而荒于嬉行成于思而毁于随
附：EDTA（乙二胺四乙酸）：即依地酸钠钙，是钙离子络合剂、洗涤剂、血液抗凝剂
常用固定液
1、醛类固定剂：作用是使组织之间相互交联，将抗原保存在原位。
（1）3中性甲醛固定液液：30甲醛10ml001molLPH74PBS90ml（2）24多聚甲醛缓冲液：40g多聚甲醛溶于01molLPBS500ml，加热搅拌（注意不要沸腾）至溶液清亮后，室温下冷却后加PBS，使总容量为1000ml（3）戊二醛－多聚甲醛缓冲液：在上述溶液中加入1％的戊二醛（4）Boui
液：40％甲醛250ml，冰醋酸50ml饱和苦味酸750ml（5）PLP液过碘酸－赖氨酸－多聚甲醛固定液
2、丙酮及醇类固定剂：原理是使组织中的蛋白质和糖类沉淀
（1）AAA液：纯酒精85ml，冰醋酸5ml，浓甲醛10ml（2）Clzrke液：纯酒精95ml，冰醋酸5ml多用于冰冻切片的后固定（3）Car
oy液：纯酒精60ml，氯仿30ml，冰醋酸10ml，多用于癌基因蛋白，抗癌基因蛋白等抗原的固定保存（4）丙酮：常用于冰冻切片和细胞涂片的后固定，用前在4℃冰箱预冷，切片在冷丙酮中固定5～10mi
3、其他固定剂
（1）Ze
ker液：适合免疫球蛋白抗原的检测（2）四氯化锇液：是电镜研究中所必需的固定液
抗原修复
用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片，原因：a福尔马林固定时，组织中的许多氨基酸残基在分子内或分子间形成了醛键，使得不少抗原决定簇被封闭；b甲醛的聚合作用，使蛋白质分子间相互交联形成大分子网络，也导致了抗原决定簇被掩盖，这就使得相当部分的抗原不能与抗体很好是进行反应。
①抗原热修复（1）高压热修复：在沸水中加入05molLEDTA缓冲液（pH80）或001M枸橼酸钠缓冲溶液（pH60）。盖上不锈钢高压锅的盖子，但不进行锁定。将玻片置于金属染色架上，缓慢加压，使玻片在缓冲液中浸泡5分钟，然后将盖子锁定，小阀门将会升起来。10分钟后，去除热源，置入凉水中，当小阀门沉下去后打开盖子。本方法适用于较难检测或核抗原的抗原修复。（2）煮沸热修复：电炉或者水浴锅加热001M枸橼酸钠缓冲溶液（pH60）至95℃左右，放入组织芯片加热1015分钟。（3）微波热修复：在微波炉里加热001M枸橼酸钠缓冲溶液（pH60）至沸腾后将组织芯片放入，断电，间隔510分钟，反复12次。适用的抗原有：AR，Bax，Bcl2，Cfos，Xju
，Ckit，Cmyc，Ecadheri
，Chromogra
i
A，Cycli
，ER，Heatshockprotei
，HPV，Ki67，MDMZ，p53，p34，p16，p15，Pglycoprotei
，PKC，PR，PCNA，ras，Rb，TopoismeraseⅡ等。
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