金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶，它能迅速而稳定地吸附蛋白，对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此，用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子如葡萄球菌A蛋白等作为探针，就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位，甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒，且胶体金的电子密度高，所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色，因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。
4、免疫铁蛋白法
5、放射免疫自显影法
1华中科技大学同济医学院
f免疫组化技术
业精于勤而荒于嬉行成于思而毁于随
标本
1、组织标本：石蜡切片（病理切片和组织芯片）、冰冻切片2、细胞标本：组织印片、细胞爬片、细胞涂片
操作步骤
①石蜡切片制作
1、固定：取组织，用PBS冲洗，放入4多聚甲醛磷酸盐缓冲液内固定12h2、脱水：倒去固定液，用蒸馏水冲洗3次，再用50酒精冲洗2次，用酒精逐级脱水，70酒精1天，80酒精过夜，95酒精3h，无水酒精（Ⅰ）、（Ⅱ）各2h3、透明：11无水酒精二甲苯45mi
，二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）各30mi
4、包埋：（恒温箱内进行）浸入石蜡，11二甲苯石蜡（58℃）45mi
，石蜡（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）共25h，用石蜡（Ⅲ）包埋组织5、切片：包埋后的组织块经修整后，用切片机切成57μm，的石蜡带6、贴片：将组织石蜡块在50℃温水中展片，然后用处理干净的载玻片捞片，组织带可黏在载玻片上
（洗片：1HCl浸泡过夜、蒸馏水冲洗、95酒精浸泡2h后擦干→涂胶：防脱剂多聚赖氨酸）7、烤片：68℃恒温箱内烤片2h
②SP三步法
1、脱蜡：脱蜡前应将组织芯片在室温中放置60mi
，或60℃恒温箱中烘烤20mi
，后用二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）浸泡，共25mi
2、水化：无水酒精（Ⅰ）、（Ⅱ）各2mi
，下行至95、80、70酒精（Ⅰ）（Ⅱ）各2mi
3、PBS冲洗23次，每次5mi
4、阻断：3H2O2去离子水（或80甲醇）孵育10mi
，以灭活内源性过氧化物酶活性5、PBS冲洗23次，每次5mi
6、抗原修复：置001M枸橼酸缓冲液（PH60）中用煮沸（95℃，1520mi
），自然冷却20mi
以上，再用冷水冲洗缸子，加快冷却至室温7、PBS冲洗23次，每次5mi
8、封闭：滴加正常山羊血清封闭液，室温孵育20mi
，甩去多余液体9、滴加Ⅰ抗50μl，室温静置1h，或者37℃1h，或者4℃过夜（需在37℃复温45mi
）10、PBS冲洗23次，每次5mi
11、滴加辣根过氧化物r