化学与生物工程学院生物工程系
生物化学实验报告
课程名称：实验项目：实验室名：实验时间：任课老师：
生物化学氨基酸的分离鉴定纸层析法
生物化学实验室20121115杨艳
专业班级：生物工程1142学生姓名：晔学号：201121030219组别：第五组

专业word可编辑

f




实验内容【实验目的】
通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理，掌握氨基酸纸层析的操作方法。
【实验原理】
纸层析法（paperchromatography）通常用于蛋白质的氨基酸成分的定性和定量。1944年A．J．P．马丁第一次用纸层析分析氨基酸，得到很好的分离效果。到现在为止，纸层析法已经成为定性或定量测定多肽，核酸碱基，糖，有机酸，维生素，抗生素等物质的一种最简单易行的分离分析工具。
层析用于分析简单的混合物时可做单向层析。对于复杂的混合物，可做双向层析。其原理是以滤纸为惰性支持物的分配层析，层析溶剂由有机溶剂和水组成。滤纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流动相。当有机相流经固定相时，由于分配系数不同，结果物质在两相间不断分配而得到分离。
其一般操作是将样品溶解在适当溶剂中，点样在滤纸的一端；再选用适当的溶剂系统，从点样的一端通过毛细现象向另一端展开，展开完毕，取出滤纸晾干或烘干，再以适当的显色剂或紫外灯、荧光灯下观察其图谱。样品经展开后某一物质在纸层析谱上的位置常用比移值（rateoffolwRf）来表示。Rf原点至层析斑点中心的距离原点至溶剂前沿的距离XY
在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与被测物的结构、性质、溶剂
系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用单向纸层析法分离氨基酸。
【实验器材】

专业word可编辑

f




1器材层析缸、毛细管、小烧杯、量筒、培养皿、分液漏斗、层析滤纸新华一号、喷雾器
（或白瓷盘），烘箱（或吹风机）、铅笔、直尺
2试剂
1、扩展剂40mL将20mL水饱和的正丁醇和5mL醋酸以体积比4：1在分液
漏斗中进行混合。然后与15mL蒸馏水混合，充分振荡，静置后分层，放出下层水层。取
漏斗内的扩展剂约5mL置于小烧杯中做平衡溶剂，其余的倒人培养皿中备用。
2、氨基酸溶液
0．5％的赖氨酸、脯氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液各组份
浓度均为0．5％各配置5mL。
3、显色剂50～100mL0．1％水合茚三酮正丁醇溶液。
【实验步骤】
（1）检查培养皿是否干燥、洁净；若否，将其洗净并置于干燥箱内120℃烘干。（2）平衡r