抗体从cDNA表达文库中筛选相应的克隆。
作业二:一、名词解释:
1、基因工程:在体外将外源基因进行切割并与一定的载体连接,构成重组DNA分子并导入相应受体细胞,使外源基因在受体细胞中进行复制、表达,使目的基因大量扩增或得到相应基因的表达产物或进行定向改造生物性状。简单概括,就是将外源目的基因与载体重组后再进入宿主细胞的过程。2、载体:能载带微量物质共同参与某种化学或物理过程的常量物质,在基因工程重组DNA技术中将DNA片段(目的基因)转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和动植物病毒。3、转化:指将质粒或其他外源DNA导入处于感受态的宿主菌,并使其获得新的表型的过程。4、感染:利用噬菌体将外源DNA导入宿主细胞的方法。5、转导:由噬菌体将一个细胞的基因传递给另一细胞的过程。它是细菌之间传递遗传物质的方式之一。其具体含义是指一个细胞的DNA或RNA通过病毒载体的感染转移到另一个细胞中。
6、转染:指真核细胞主动摄取或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。常用的方法有电穿孔法,磷酸钙共沉淀法,脂质体融合法等。二、简答题1、YAC载体具有什么样的功能性DNA序列?为什么在克隆大片段时,YAC具有优越性?答:YAC带有天然染色体所有的功能元件,包括一个着丝粒,一个DNA复制起点,两个端粒。
YAC能够容纳长达几百kb的外源DNA,这是质粒和黏粒办不到的。大片段的插入更有可
f能包含完整的基因,在染色体步移中每次允许更大的步移距离,同时能够减少完整基因组文库所需的克隆数目。2、列举质粒载体必须具备的4个基本特性。
答:1独立复制;2有选择标记;3有独特的酶切位点;4能转化但不扩
散。
3、PCR的基本原理是什么?用PCR扩增某一基因,必须预先得到什么样的信息?
答:DNA半保留复制的原理,在体外进行DNA的变性、复性和引物延伸。2至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA序列。
4、cDNA克隆与基因组克隆有何不同?
答:基因组克隆包含所有不在cDNA中出现的内含子。
5、怎样将一个平末端DNA片段插入到EcoRI限制位点中去?
答:化学合成一些长为10bp含有EcoRI识别位点的短的DNA片段,然后与待克隆片段两端
连接起来,如果用EcoRI切割这种连接片段,就会产生EcoRI的单链末端。这种片段就可以
插入到任何EcoRI的限制性内切酶位点中。
三、论述题
什么是Wester
印迹?它与Souther
印迹有什么不同
答:Wester
印迹是将蛋白质经电泳分离后从凝胶中转移到固相支r