mol／L；4高pH80以上；5含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等；6有非Mg2的二价阳离子存在如M
2，Cu2，C02，Z
2等。3、影响DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些？答：（1）DNA的纯度（2）DNA甲基化的程度（3）酶切消化反应的温度（4）DNA的分子结构（5）核酸内切限制酶的缓冲液4、什么是Kle
ow酶？有哪些活性？在基因工程中有什么作用？答：Kle
ow酶是1974年Kle
ow用枯草杆菌蛋白酶水解DNA聚合酶I，得到两个片段，其中大片段的分子量为75kDa，它具有53聚合酶和35外切核酸酶的活性，小片段具有53外切核酸酶活性。由于大片段失去了DNA聚合酶I中会降解5引物的53外切核酸酶的活性，所以在基因工程中更有用。
Kle
ow酶主要有下列用途：1修复反应，制备平末端可用Kle
ow酶修复限制性内切核酸酶或其他方法产生的5或3突出末端，制备平末端，这样可以使原来具有不相容的黏性末端的DNA片段通过平末端重组。如在反应系统中加入放射性同位素标记的脱氧核苷酸，用这种末端填补的方法可以制备3末端标记的探针。用Kle
ow酶修复5突出末端的反应主要是利用了Kle
ow酶的DNA聚合酶活性，是填补反应；而修复3突出末端则是用Kle
ow酶的35外切核酸酶的活性，是切割反应。用Kle
ow酶的切割反应来修复3突出末端是不理想的，改用T4DNA聚合酶或其他的酶是更好的选择。2标记DNA3突出末端protrudi
ge
d该反应分两步进行：先用35的外切核酸酶活性除去3突出末端，产生3隐含末端，然后在高浓度的标记底物32pdNTP存在下，使降解35作用与聚合53作用达到平衡。这种反应也叫交换或取代反应excha
ge／replaceme
treactio
。不过这一反应用T4DNA聚合酶的效果更好，因它的35外切核酸酶活性较强。3其他的一些用途：包括用双脱氧末端终止法进行DNA序列分析、用于cDNA第二链的合成、在定点突变中用于合成第二链、用引物延伸法primerexte
sio
制备单链DNA探针等。
f5、细菌碱性磷酸酯酶和小牛肠碱性磷酸酯酶有什么不同？在基因工程中有什么用途？答：主要差别是：CIP68°C时失活，而BAP68°C稳定，且耐酚抽提。应用：
1dsDNA的5端脱磷酸，防止DNA的自身连接。但是用CIP处理后，最好将CIP除去后，再进行连接反应。
2DNA和RNA脱磷酸，然后用于多核苷酸激酶进行末端标记。
三、论述题1、如果知道某一基因的功能及其相应的蛋白质的氨基酸序列组成，可以通过何种方法克隆该基因答：可以通过合成核苷酸探针或设计简并PCR引物从cDNA文库或基因组文库中筛选。或者利用相应的r