要。因此,微滴多重PCR偶联基因芯片技术以其高灵敏度和高特异性的优势,在早期鉴定胎儿性别以及对性连锁遗传病的筛选方面奠定了重要的基础。
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22定性、定量、高通量检测传统生物基因定性、定量PCR检测技术每次只能对单一一种的基因进行检测,而对于基因成分不明确的样品,需要通过多种检测方法、进行多次实验才能确定,周期长、工作量大,且成本高。因此,在未来的生物基因检测中,这种检测技术已越来越不能胜任一次处理含有几种、十几种、几十种生物基因的样品检测的特殊需要,尤其是大数量的生物样品,需要更有效的、快速的高通量检测方法。虽然多重常规PCR、定量PCR能一次实验可同时检测几种基因,但在同一反应管中进行多重PCR效果常常很差,产生非特异扩增,短的片段经常会被优先扩增,在同源区的重组常会产生人工片段。其关键是引物的设计,引物和引物之间,引物本身,产物和产物之间不能有错配,复杂的多重PCR引物设计必须依赖于较为大型的数据库和计算机模拟PCR结果,以及后期的验证,这个不是一般小型实验室可以完成的事情。目前国内外一些机构及公司开展了高通量检测方法的研究,如BioRad公司、SGS检测机构开发了一些转基因检测试剂盒等以及已经广泛应用于临床研究的基因芯片技术。然而这些检测方法成本非常高,技术复杂、人员要求高并且需要昂贵的仪器来完成。目前国内外的生物基因产品检测方法仍以单一的定性、定量PCR的检测方法为主。我们实验室将微滴PCR和引物荧光标记技术结合起来建立了一种基于多重微滴PCR偶联荧光分光光度法的生物基因定性、定量、高通量检测方法。这种方法可以极大地提高核酸DNA分子分析的通量。这种复合检测方法,通常是将几对引物中的上游引物或者下游引物进行荧光标记后,进行多重微滴PCR,其PCR产物通过荧光分光度法进行定性、定量和高通量检测。23高通量测序中的应用测序技术最早出现于1954年,早期测序技术主要是用化学降解法测定核酸序列。在2005年Nature报道中,454lifescie
ce公司提出了一种基于微滴PCR的高通量测序技术,高通量测序技术的相关研究工作也由此展开。新一代高通量测序技术的代表者有ABI公司的SOLID测序平台、罗氏的454测序序技术平台和Illumi
a公司的Solexa测序平台。2008年,454lifescie
ce公司及随后的Roche公司推出了全新的GSFLXSystem系列。GSFLX系统可以用“一个片段一个磁珠一条读长(o
efragme
to
ebeado
eread)”来概括。“一个片段一个磁珠”r