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R技术的建立与发展1998年,Tawfik等提出了油包水乳化液颗粒的概念,各种生化反应都可以在这个液体颗粒中完成。2001年Ghadessy等用乳化液颗粒进行DNA聚合酶的高效筛选,选出的DNA聚合酶耐热性高、对蛋白质抑制剂肝素具有高抵抗力。2003年,Naka
o等在乳化液颗粒中进行PCR反应,结果发现每个DNA分子都可以进行有效扩增,由此产生了微滴PCR技术。微滴PCR是在将PCR反应中的水相与油相按一定比例、转速条件下混合,从而形成无数个大小相对均匀稳定且由乳化液分隔开的小水滴,每一个小水滴都是一个单独的PCR反应空间,从而使得各个PCR反应能够独立而互不干扰地进行。微滴PCR技术的优点:(1)由于微滴PCR技术能够把不同DNA模板分隔在不同的油包水小水滴中,因此消除了反应过程中引物与引物之间、不同产物之间的相互杂交和不同产物之间的竞争抑制(2)微滴PCR反应能同时扩增109个不同的DNA模板,实现了高通量(3)灵敏度高。和常规PCR相比,微滴PCR技术的缺点是增加了一步制备微滴颗粒的过程。微滴PCR实验的成功和制成相对均匀、稳定、大小合适的微滴颗粒息息相关,不同水油比、BSA和乙醚、搅拌子的大小、搅拌速度和时间等都会对微滴的形成造成很大的影响。因此,要摸索出这些影响因素的最佳量度是该技术的不足之处。2微滴PCR技术的应用21多重微滴PCR技术结合基因芯片方法在早孕期鉴别胎儿性别在孕妇产前诊断中,通过性别鉴定可以对性别畸形以及性连锁遗传病的早期判断等起到积极的作用。性别鉴定主要方法有分子生物学方法、细胞学方法和超声波检查等。分子生物学方法和细胞学方法需要采集样品才能检测,而在采集样品过程中(例如羊水穿刺)具有一定的危险性和创伤性。超声波检查确诊时间较晚,因此上述方法在临床不能被广泛的应用。进一步研究发现,孕妇外周血液存在的胎儿DNA可以用来对胎儿进行性别鉴定,该方法可减少创伤性诊断带来的危险。利用胎儿DNA进行性别鉴定的方法有很多,使用率较高有常规PCR法和巢式PCR法。由于常规PCR很容易受到DNA模板的污染以及孕妇外周血中DNA提取方法的不同,因此会导致检测的灵敏度和特异性受到影响。而微滴多重PCR技术中,微乳液系统含有上百万个油包水小液滴,每一个小液滴都是一个微型PCR反应器,从而可以避免引物间、模板DNA之间的相互影响。因此,多重PCR的微乳液体系提高了胎儿性别检测的灵敏度和特异性。基因芯片技术可以对胎儿DNA进行高通量检测,在提高检测的灵敏度以及特异性方面至关重r
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