海口海瑞康生物科技有限公司操作规程细则内容：CYP2C19基因检测部门：技术部生效日期：
编号：FDPRO0001变更版本记录：2010年第一版批准：
目的：为保证本实验室检测实验操作的标准化，确保检测结果的准确性、重复性，制定本规程。
标本要求：1样本的收集：静脉取血1ml，加至EDTA抗凝管中。2样本的贮存、运输：抗凝全血在室温保存不超过7天，28°C不超过1个月，20°C不超过7周，血液样品反复冻融不超过5次。全血的运输必须遵守国家和当地有关规定。操作步骤：1基因组DNA提取11处理血液材料做CYP2C19基因型检测时，只需用200μl血液即可。当血液样品体积小于200μl时，可加适当体积PBS调整至200μl再进行下一步实验。12活化吸附柱吸附柱在使用前需要活化，活化方法：将吸附柱置于收集管中，加入500μl缓冲液BH1，静置23mi
，12000rpm（9500×g）离心30s；弃去收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中，在吸附柱中加入500μl缓冲液BH2，12000rpm（9500×g）离心30s，弃去收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中待用。131415取15ml离心管，做好标记，每管中加入20μl蛋白酶K溶液。加入200μl血液样品（注意：在加入血液样本之前一定要把全血充分混匀）。加入200μl缓冲液BL，振荡15秒，混匀。低速离心，使管壁血液离心至底部（注意：不可将缓冲液BL直接加入蛋白酶K中）。161756℃放置10分钟。加200μl无水乙醇，振荡15秒，混匀，低速离心。
f18
将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个已活化的吸附柱中（吸附柱放入收集管中），不要弄湿管口，12000rpm（9500×g）离心1mi
，弃去装废液的收集管，将吸附柱插入新的收集管中。
19
向吸附柱中加入500μl缓冲液BW1（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），不要弄湿管口，12000rpm（9500×g）离心1mi
，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放入收集管中。
110
向吸附柱中加入500μl缓冲液BW2（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），不要弄湿管口，12000rpm（9500×g）离心1mi
，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放入收集管中。
111112
将吸附柱放回收集管中，12000rpm（9500×g）离心1mi
，以彻底去除吸附材料中残余的漂洗液。将吸附柱转入一个干净的离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加60μl洗脱缓冲液BE，室温（推荐56℃）放置5mi
，12000rpm（9500×g）离心1mi
，将溶液收集到离心管中。
2
PCR扩增试剂的分装：CYP2C19扩增液（1和2）融溶后，将其分装到02ml离心管中，19μl管。扩增产物短
时间内可于28r