切注意,勿压破盖玻片。5观察:细菌在镜下为灰色半透明体,并呈现真运动,如在明亮的海洋中,深入浅出游来动去。(二)压滴法用途同悬滴法。【材料】1细菌:枯草杆菌812小时肉汤培养物。
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f2载物玻片:盖玻片等。【方法】1取无油污物玻片1张。2用接种环沾取枯草杆菌812小时肉汤培养物置于载物玻片中央。3加盖玻片于菌液表面,观察方法同悬滴法。三、细菌染色标本片的制备(操作)由于细菌个体微小,基本上无色透明,故将其用适当染料染色观察,方能显示它的形态、大小、构造及染色特性等,在细菌和鉴别上有重要意义。【材料】1葡萄球菌大肠杆菌1824小时普通琼脂斜面培养物。2革兰染色液。3生理盐水,载物玻片,接种环等。【方法】(一)细菌涂片的制作1涂片:取清洁无油污载物玻片一张,接种环沾取生理盐水12环置于玻片中央,再将接种环火焰灭菌待冷后,沾取葡萄球菌或大肠杆菌菌苔少许,混于生理盐水中,轻轻涂成均匀薄膜。2干燥:室温自然干燥,也可将涂面向上,远离火焰上方微加温干燥(切勿加热过度,以防将标本烧枯)。3固定:标本干燥后,通过酒精灯火焰三次(约23秒钟),以杀死细菌并使之固定于玻片上。4染色:可根据不同的染色要求,用相应染色液进行染色。(二)革兰染色法:涂片的制备方法同前,革兰染色方法可分为四步。1初染:于涂抹面上滴加结晶紫染液数滴,覆盖整个涂面,室温作用一分钟。用自来水轻轻冲洗,甩干水分。2媒染:滴加鲁戈碘液,室温作用一分钟,自来水冲洗,甩干水分。3脱色:将载物玻片浸于95酒精缸中,上下提取,边提边看,见涂面无色素下流为止(约30秒钟)。自来水冲洗,甩干水分。4复染:加稀释复红染液染30秒钟,自来水冲洗,吸水纸吸干玻片水分。5加油镜检:染色片待干后,于油镜下,调强光视野观察,呈紫色的为革
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f兰阳性菌,呈红色的为革兰阴性菌。(三)美兰染色法【方法】将涂片固定滴加美兰染液于玻片上,染12分钟,水洗、待干、镜检。【结果】此法为单染色法,菌体和细胞均染成蓝色。常用于脑膜炎球菌及白喉杆菌等细菌染色。四、细菌基本形态和特殊结构观察(一)基本形态(示教)1球形:葡萄球菌革兰染色标本片菌体正园形,染成兰紫色,呈现葡萄串状排列。G球菌。2杆形:大肠杆菌革兰染色标本片菌体短杆状,染成红色,呈分散排列。G杆菌。3螺形:霍乱弧菌革兰染色标本片菌体弧形,染成红色,呈分散排列。G弧菌。(二)特殊结构示教r