从MHCⅠⅡ类相关因子探讨针灸对带状疱疹的免疫逃避作用
学号：12007076姓名：李建伟专业：中医外科学
一研究内容、研究目标、以及拟解决的关键问题1研究内容课题以VZV免疫逃避机制中发挥着重要作用的感染病毒细胞免疫识别的MHCⅠⅡ类基因抑制为切入点，围绕IFNγ和参与免疫逃避的的两条主要途径，有目的地观察IFNγ和相关基因CⅡTa、Stat1α、Jak1、Jak2、MHCⅠ、MHCⅡ的表达量、分布及变化规律，进一步检测CⅡTamRNA、MHCⅠmRNA、MHCⅡmRNA的表达变化以及外周血CD4、CD8T淋巴细胞亚群、NK细胞活性的动态变化，并对上述指标的相关性及变化规律进行分析，说明调节VZV病毒感染的免疫逃避机制是针灸治疗带状疱疹、减轻疼痛和后遗症的关键。且明确针刺与放血作用机制的差异所在。主要开展以下工作：研究内容：（1）皮损组织病理学观察。（2）镜检：外周血有核细胞计数、白细胞、淋巴细胞分类计数、巨噬细胞吞噬功能。（3）流式细胞仪检测：外周血CD4、CD8T淋巴细胞亚群、NK细胞活性。（4）免疫组化法ABC染色法检测：皮损组织IFNγ、CⅡTa、Stat1α、Jak1、Jak2、MHCⅠ、MHCⅡ、蛋白的表达及分布规律。（5）wester
blot检测：皮损组织IFNγ、CⅡTa、Stat1α、Jak1、Jak2、MHCⅠ、MHCⅡ蛋白量的表达。（6）RTPCR法检测：皮损组织CⅡTamRNA、MHCⅠmRNA、MHCⅡmRNA。2研究目标：221旨在明确针灸治疗带状疱疹，减轻疼痛和后遗神经痛，与调节MHCⅠⅡ类相关基因、蛋白的分布及表达关系，为针灸治疗免疫逃避类疾病提供科学依据。222通过比较针灸与传统抗病毒药物的作用差异，为解决带状疱疹病毒耐药性问题提供理论依据。223旨在明确针刺与放血在治疗疱疹作用机制中的差异。
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f3拟解决的关键性问题：针刺放血对MHCⅠⅡ类相关基因、蛋白的调节与其有效干预VZV病毒免疫逃避机制的关系。二拟采用的方案及可行性分析1拟采用的方案实验环境：实验室相对封闭，自然采光，环境温度控制在20℃～25℃之间，湿度控制在60左右。实验动物：清洁级昆明种小鼠，体重22～24g，笼养，自由饮食，由上海市实验动物中心提供全价动物颗粒饲料。11分组及造模：第一次实验采用大鼠192只，按照体重分层随机，分为6组，每组8只，在造模完成后开始治疗，连续7天，隔日（第1、3、5、7天）处死一批，动态观察针刺放血对大鼠VZV病毒初感染的影响；第二次实验在造模后30天开始治疗，观察针刺放血对大鼠VZV病毒潜伏、复发的影响，其他处理同上，第7天处死取材观察；造模：腹腔注射VZV8805株系病毒，r