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按照100TCID5001ml病毒量接种细胞,感染后48小时,模型即成。模型组:造模方法同上,每天陪同正常组、针刺组、放血组、针刺放血组固定,连续7天。药物组:造模方法同上。左侧腹腔注射ACV01gkgd,连续三天,每天陪同正常组、针刺组、放血组、针刺放血组固定,连续7天。针刺组:造模方法同上。按照造模时间的先后顺序,在造模完成后,开始针刺,进针02~03mm,平补平泻,留针10mi
,每日1次,连续7天。放血组:造模方法同上。按照造模时间的先后顺序,使用皮肤针沿皮损和脊神经叩刺,连续7天。针刺加放血组:方法同针刺组和放血组,治疗连续7天。正常组:腹腔注射同体积生理盐水。每天陪同模型组、针刺组、艾灸组固定,连续7天。12取材方法:
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f造模结束后,在模型组40只中随机处死8只,取材检测VZV对对小鼠相关指标的影响。针刺组、放血组、针刺加放血组、药物组、正常组在治疗后的第1、3、5、7天随机处死8只小鼠取材。取材放入80oC低温冰箱保存、备检。13穴位选取:固定小鼠方法:根据小鼠的形体,在木板上钉上四个适当距离的铁钉,将夹子套在铁钉上,用夹子夹住小鼠的四肢以做固定。小鼠穴位定位参考《实验针灸学》,模拟小鼠的定位方法:“大椎”在第七颈椎与第一胸椎间;“膈俞”在第七胸椎下两旁肋间,左右侧各一穴;“合谷”在在手背,当第二掌骨桡侧的中点处,“曲池”在在肘横纹外侧端,当尺泽与肱骨外上髁连线中点,“委中”在在横纹中点,当股二头肌腱与半腱肌腱的中间,“尺泽”在在肘横纹中,肱二头肌腱桡侧凹陷处。14观察指标及方法:141皮肤组织病理切片142镜检:外周血有核细胞计数、白细胞、淋巴细胞、巨噬细胞分类计数各组小鼠每天定时,专人割尾静脉采血10μl,加入038ml的白细胞稀释液中,摇匀,静置3分钟,光镜查外周血有核细胞、白细胞数和淋巴细胞、巨噬细胞分类计数;143流式细胞仪检测:外周血CD4、CD8T淋巴细胞亚群、NK细胞活性。①制备样品:处死动物,离心,收集细胞悬液,滴加特异性免疫荧光抗体,用流式细胞仪上机检测并进行分选。②流式细胞仪检测:将分选细胞清洗、离心1500RPM,10mi
,清洗两次,弃上清;加入PI荧光标记抗体;用流氏细胞仪分别检测CD4、CD8T淋巴细胞亚群、NK细胞活性。③分析方法:测出的数据经PHOENIX公司分析软件Multicycle处理,得出细胞各周期的CD4、CD8T淋巴细胞亚群、NK细胞相对含量和百分数并绘出DNA分布的直方图。144免疫组化法ABC染色法检测r
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