方法(1)不同浓度水平的样本可通过将高浓度样本与低浓度样本进行倍比稀释得到,注意在进行液体吸取时应选择精密度与准确性好的移液装置。制备时应将样本完全混合并避免蒸发或其他使样本变质的情况。每份样本的浓度与体积单位应统一。(2)如果高低浓度血清的值未知,可将每种血清编码,用编码代表每个血清的相对浓度。对于等浓度间隔样本,可用连续整数(如1、2、3、4、5)代表连续样本。进行数据处理时可用样本号代替X值。表1和表2中描述的样本制备过程是按照等浓度间隔的设计进行的,每个浓度水平的样本量为100ml。制备非等浓度间隔的样本时应明确各样本间的浓度关系,测定时可以这些样本间的相对浓度比值做为X值。
10
f表1:11个浓度水平的样本制备
样本号
1
2
3
4
5
6
低浓度血清ml100090080070060050
高浓度血清ml000010020030040050
样本号
7
8
91011
低浓度血清ml040030020010000
高浓度血清ml060070080090100
表2:5个浓度水平的样本制备
11
f样本号
1
2
3
4
5
低浓度血清ml100075050025000
高浓度血清ml000025050075100
(3)样本的特殊处理:在无法得到适用的人血清时,需对样本进行一些特殊处理以满足实验要求。这些处理过程包括稀释、加入添加物或透析、热处理等,无论进行何种处理均应以保持基质恒定为基本原则。在评价报告中应对所使用的稀释液、添加物、溶剂等的材料来源加以注明。
样本稀释液应选用由厂家推荐或经实验室证明可使用的产品,如可采用5牛血清白蛋白或人白蛋白溶液。
欲提高样本浓度时可在样本中添加分析物纯品。在添加物为溶液状态时,应注意添加液体对样本的稀释作用(小于10)并注明所用溶剂。
2.实验过程21建立线性范围:需测定911个浓度水平,每个浓度水平重复测定34次。22验证标称线性参数:需测定46个浓度水平,每个浓度水平重复测定34次。
12
f23所有样本应在一次运行中或几次间隔很短的运行中随机测定,最好在一天之内完成。
3数据处理31数据记录(1)可参考表3进行数据记录。(2)可采用其它形式进行记录,但应注意保留原始数据。
表3:线性评价数据记录表(11个浓度水平,重复测定4次)
项目:
样品:
仪器:
试剂批号:
校准品批号:
操作者:
审核者:
测定日期:
样本号测定1测定2测定3
测定4
均值
1
2
3
4
5
13
f6
7
8
9
10
1132数据可用性检查可通过绘制散点图对测定数据的可用性进行初步检查。以样本号或样本浓度为X轴,以测定结果为Y轴做图,r