实验二细菌的芽孢染色鞭毛染色荚膜染色
一实验目的
1学习细菌的芽孢染色法
2学习细菌的鞭毛染色法
3学习细菌的荚膜染色法
二实验原理
1芽孢染色的原理
细菌的芽孢具有厚而致密的壁。透性低不易着色若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色芽孢呈无色透明状。芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色但一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的。所有的芽孢染色法都基于同一个原则除了用着色力强的染料外还需要加热以促进芽孢着色。当染芽孢时菌体也会着色然后水洗芽孢染上的颜色难以渗出而菌体会脱色。然后用对比度强的染料对菌体复染使菌体和芽孢呈现出不同的颜色因而能更明显地衬托出芽孢便于观察。
2鞭毛染色的原理
细菌的鞭毛极细直径一般为001002μm只有用电子显微镜才能观察到。但是如采用特殊的染色法则在普通光学显微镜下也能看到它。鞭毛染色的方法很多但其基本原理相同即在染色前先用媒染剂处理、让它沉积在鞭毛上使鞭毛直径加粗然后再进行染色。常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。
3荚膜染色的原理
荚膜是细菌分泌到菌体周围的一层黏液状物质通常是多糖和多肽类物质由于荚膜与染料间的亲和力弱不易着色通常采用负染色法染荚膜即设法使菌体和背景着色而荚膜不着色从而使荚膜在菌体周围呈一透明圈。由于荚膜的含水量在90以上故染色时一般不加热固定。以免荚膜皱缩变形。
三实验器材
1菌种培养24h的枯草杆菌Bacillcussubtilis、培养1216h的变形杆菌斜面培养3d的固氮菌。
f2染色液和试剂5孔雀绿水溶液、番红水溶液鞭毛染色液A液与B液蒸馏水香柏油显微镜擦拭液绘图墨水或黑色素溶液
3器材酒精灯、接种环、镊子、载玻片、擦镜纸、吸水纸、记号笔、试管夹、显微镜等。四实验方法
一芽孢染色
1涂片按常规方法将待检细菌制成一薄的涂片。
2晾干固定待涂片晾干后在酒精灯火焰上通过3次。
3染色
A加染色液。加5孔雀绿水溶液于涂片处染料以铺满涂片为度然后将涂片用试管夹夹住用酒精灯火焰加热至染液冒蒸汽对开始计算时问约维持45mi
。加热过程中要随时交替添加染色液和蒸馏水切勿让标本干涸加热时温度不能太高。
B水洗待玻片冷却后用水轻轻地冲洗直至流出的水中无染色液为止。
C复染用番红液染色23mi
。
D水洗、晾干或吸干。
4镜捡先低倍再高倍最后在油镜下观察芽孢和菌体的形态。
二鞭毛染色
1制片吸取少量蒸馏水滴在洁净玻片的一端无菌操作在斜面上取菌少许在蒸馏水中轻沾立即将玻片倾斜使菌液缓r