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:A空白、A标准和A待测样品;然后按照式22计算得到待测样品浓度。
C待测样品=C标准A待测样品A空白A标准A空白
22
其中A空白:
毫升蒸馏水加入到m毫升试剂中,在恒温环境中反应一定时间后,
反应液的吸光度。
A标准:
毫升标准液加入到m毫升试剂中,在恒温环境中反应一定时间后,反
应液的吸光度。
A待测样品:
毫升待测样品液加入到m毫升试剂中,在恒温环境中反应一定时
间后,反应液的吸光度。
C标准:试剂盒中标准液的给定浓度。
,m的数值由试剂盒给定,或者根据试剂盒按比例确定。反应温度和反应时间也由试剂盒给定。不难看出终点分析法中血清中待测物质的含量和反应液的最终吸光度成正比而与反应过程无关。它属于分析化学中的标准对照法。在应用时应注意试剂空白的测量,一般当参比溶液选择蒸馏水时,如果采用上式进行计算,要先计算试剂空白的吸光度,然后再从标准和待测样品反应液吸光度中扣除。也可以直接采用试剂空白作为参比溶液,检测吸光度,即可认定A空白为0。2)速率法是和终点法相对应的,适用于酶活性和代谢物检测,多有酶的参与。通过测定单位时间内样品和试剂的吸光度变化来测定酶的反应速率。原理是在酶反应的最佳条件下,用物理、化学或酶促反应的分析方法,在反应速度恒定期(零级反应期)来连续观察和记录一定反应时间内底物或产物量的变化,以单位时间酶反应初速度计算出酶活力的大小和代谢物的浓度,计算方法为:
7
f江苏大学硕士学位毕业论文
CsAsmi
F
(23)
式中,Cs—待测样品的浓度;Ami
—待测样品的吸光度变化率,由线性回归得到;F—常数,由用户所选择的试剂给出(因素值)或由仪器测量标准样品得到:
F
CSTDAmi
STD
(24)
式中:CSTD—标准样品的浓度值;Ami
STD—标准样品的吸光度变化率。3双波长测定方法,其原理是检测待测样品的吸光度时,同时用两个波长检测,用主波长的吸光度减去副波长的吸光度,并与标准样品比较,计算待测样品的浓度,即:
CsAs2As1F
(25)
式中,As1—待测样品在副波长下的吸光度;As2—待测样品在主波长下的吸光度;
F—常数,由用户所选择的试剂给出(因素值)或由仪器测量标准样品得到:
F
CSTDASTD2ASTD1
(26)
式中,ASTD1—标准样品在副波长下的吸光度;ASTD2—标准样品在主波长下的吸光度双波长法不仅可以有效地校准样本的混浊、溶血、黄疸等,还可对电源波动有补偿效果。r
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