、材料与方法：以流程图示意
材料：1、样品：健康人血清（新鲜、无溶血、无沉淀物或细菌滋生）2、试剂：03molL的PH65醋酸铵缓冲液、006molL的PH65醋酸铵缓冲液、002molL的PH65醋酸铵缓冲液、15molL的NaCl03molNH4Ac溶液、饱和硫酸铵溶液、092molL（20）磺基水杨酸、005molL（1）BaCl2溶液、氨基黑染色液、巴比妥缓冲液、漂洗液。3、仪器及器材：层析柱、烧杯、移液枪、加样枪、试管、滤纸、醋酸纤维素薄膜、黑色反应板、铁固定架、螺旋夹、离心管和离心机、培养皿、载玻片、滤纸、平头镊子、电泳槽、直流稳压电泳仪。
f方法：
粗提
脱盐
纯化
纯度鉴定
（盐析法）（凝胶层析法）（离子交换层析法）
（电泳）
取血清08ml，边摇边缓慢滴加饱和硫酸铵溶液08ml，混匀室温放置10mi
，4000rmi
离心10mi
盐
析沉淀（含球蛋白）加水06ml溶解
上清液（含清蛋白、少量α球蛋白和β球蛋白
过葡聚糖凝胶G25层析柱（10×7cm）
过葡聚糖凝胶G25层析柱（10×7cm）
用1ml002molLNH4Ac缓冲液清洗层析柱内壁继续凝用002molLpH65NH4Ac缓冲液2ml洗脱，流出液量约1ml时开始检测蛋白质
胶
磺基水杨酸检测蛋白质柱
收集含有蛋白质的峰液12d层
此时磺基水杨
酸和BaCl2检测
系
可能同时阳性
除
继续用2ml002molL
NH4Ac缓冲液洗涤
盐
BaCl2检测
SO42阴性
用23ml002molLNH4Ac缓冲液再生平衡
用1ml002molLNH4Ac缓冲液清洗层析柱内壁继续用002molLpH65NH4Ac缓冲液2ml洗脱，流出液量约1ml时开始检测蛋白质
磺基水杨酸检测蛋白质
收集含有蛋白质的峰液12d
此时磺基水杨酸和BaCl2检测可能同时阳性
继续用2ml002molLNH4Ac缓冲液洗涤
BaCl2检测SO42阴性
用23ml002molLNH4Ac缓冲液再生平衡
离子交换柱层析纯化
f除盐后收集的球蛋白
除盐后收集的清蛋白
离
子
用1ml002molLNH4Ac缓
冲液清洗层析柱内壁继续
交
用002molLpH65NH4Ac
缓冲液3ml洗脱，流出液量
换
约1ml开始检测蛋白质
柱
层
纯
化
DEAE纤维素柱不用再生，可直接用于纯化清蛋白
用1ml00６molLNH4AC缓冲液清洗层析柱内壁用约５ml006molLNH4AC缓冲液流洗，除去α球蛋白和β球蛋白
离子交换柱再生和蛋白纯度鉴定
取浓度最高的1管作纯度鉴定（醋酸纤维素薄膜电泳法）
2管均作纯度鉴定（醋酸纤维素薄膜电泳法
DEAE纤维素柱先用6mll5molLNaCl03molLNH4Ac溶液流洗，再用10ml002molLNH4Ac缓冲液流洗再生平衡
准备电
泳点样
纯
将浸泡在巴比妥缓冲液中的醋酸纤维薄膜用镊子取出，用滤纸吸去多余的缓冲液，在粗r