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细菌鞭毛染色的方法
目前,细菌鞭毛染色方法根据染色剂的不同,可分为碱性复红法、副品红法、结晶紫法、维多利亚蓝B法、镀银染色法和荧光蛋白染色法6类,前5类方法的媒染剂成分中均含有单宁酸,染色原理通常是采用不稳定的胶体溶液做媒染剂,并使其沉淀于鞭毛上而使“鞭毛肿胀(tara
dfeather)”,鞭毛直径加粗,进一步染色后即可在油镜下观察。1碱性复红法和副品红法1926年由Gray首创,其媒染液成分包括20丹宁酸水溶液20ml,硫酸钾铝饱和水溶液5ml,饱和氯化汞水溶液2ml,3碱性复红乙醇(95)溶液04ml,临用前混合,且需过滤后方可使用。染片时,媒染剂染色约6mi
,具体时间尚需在试验中摸索确定,染色液是抗酸染色ZiehlNeelse
石碳酸复红染液,染片时需要1小片吸水纸盖在涂片上,染色3mi
。由于该方法媒染剂混合物不稳定、操作复杂、经验性强。Leifso
于1930年建立了副品红法,并于1938年和1951年两次对该方法进行了改良,称为Leifso
方法。染色试剂由3种溶液组成:A为15NaCl水溶液,B为3单宁酸水溶液,C为乙酸副品红09g,碱性副品红03g溶解于100ml95乙醇溶液中。使用时把等体积A和B混合,然后再加2体积C与之相混。该试剂冷藏可保存1~2个月。2结晶紫法,又称Ryu法1937年由Ryu建立,1982年由Kodaka等进行了改良。媒染
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f剂:5石碳酸10ml,2g单宁酸和10ml饱和硫酸钾铝。染色剂:饱和结晶紫乙醇溶液,即12g结晶紫溶于100ml无水乙醇中。使用时把10份媒染剂与1份染色剂混合,染色5mi
。1989年,Heimbrook等使用改良的Ryu染色试剂,采用湿片技术进行鞭毛染色,虽然可以观察到细菌鞭毛,但效果不好。Ryu染色方法优点是试剂比较稳定,目前Difco公司已经研制出该方法的商品试剂盒,但染色效果亦不甚理想3维多利亚蓝B法1990年由I
oue等报道日本制药株式会社Shio
ogiSeiyaku研制出一种细菌鞭毛染色商品试剂盒。其试剂组成包括维多利亚蓝B、苯酚、单宁酸和硫酸钾铝,染色约需7mi
。该试剂保存期约为6个月,关于其染色效果虽然有过一篇文献评述,但却没有采用评分法进行评价,很难判断其染色效果。4镀银染色法1958年Rhodes根据Fo
ta
a的螺旋体改良镀银染色法,建立了一种细菌鞭毛镀银染色法。试剂分为媒染剂和银染剂。媒染液:10单宁酸10ml加5ml饱和硫酸钾铝水溶液,再加1ml苯胺饱和水溶液形成沉淀,通过摇动又能重新溶解,加入5FeCl3水溶液1ml形成黑色溶液,稳定10mi
后使用。银染液:配制5AgNo3水溶液100ml取出10ml备用,再缓r
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