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或者直接计算出各种蛋白质的百分含量。
实验五影响酶活性的因素
【目的和要求】1巩固温度、pH值、激活剂、抑制剂对酶活性影响的认识。2学习测定酶的最适温度、最适pH值的简单方法,学习检测激活剂和抑制剂的方法。本实验分为三个小实验。
一、温度对酶活性的影响
【原理】
温度对酶的活性有显著影响。温度降低,酶促反应减弱或停止,温度升高,反应速度加
快,当上升至某一温度时,酶促反应速度达最大值,此温度称为酶的最适温度。温度继续升
高,反应速度反而迅速下降。人体内大多数酶的最适温度在37℃左右。体外实验,酶的最
适温度随反应时间而异,温度愈高,酶蛋白变性愈严重,到80℃时,酶活性几乎完全丧失。
以唾液淀粉酶为例,唾液淀粉酶催化淀粉水解生成各种糊精和麦芽糖。淀粉溶液属胶体
溶液,具有乳样光泽,与碘反应呈蓝色;糊精根据分子大小,与碘反应分别呈蓝、紫、红、
无色等不同的颜色。麦芽糖不与碘呈色,但具有自由半缩醛羟基,不具还原性。根据上述性
质,可以用碘检查淀粉是否水解及其水解程度,间接判断唾液淀粉酶是否存在及其活性大小。【仪器】
公用:冰浴1个×2沸水浴1个×2恒温水浴1个×22ml唾液吸量管1支×4烧杯1只×20
个人:中试管6支白磁板1块×24滴管3个×20小漏斗1只×8【试剂】
11%淀粉液,4℃冰箱存放,不超过一周。2碘液:称取I21g,KI2g同溶于100ml蒸馏水中,棕色瓶内存放。【操作】1收集唾液:为清除口内食物残渣,用自来水漱口,然后再含一口自来水35分钟,自然流到小烧杯中。此步骤可以两人合作,以下步骤需每人作一份。2取试管两支,各加小烧杯中唾液2ml,一管加热煮沸5分钟,另一管置冰浴中预冷5分钟,放置备用即为唾液淀粉酶溶液。3另取试管4支,编号,按下表依次操作:
管号
1
2
3
4
步骤
第一步
各管分别加1%淀粉溶液20滴
f第二步第三步第四步
第五步观察结果
04℃冰浴保温5分钟
预冷唾液10滴预冷唾液10滴
摇匀后04℃冰浴保温10分钟
碘液2滴
移入37℃水浴保温10分钟中后再加
碘液2滴
37℃水浴保温5分钟唾液10滴煮沸唾液10滴摇匀后37℃水浴保温10分钟
碘液2滴
碘液2滴
【注意事项】1各人唾液淀粉酶活力不同,如按上法制得的唾液消化太快或太慢,可重新制备唾液或
向反应系统中多加一些唾液或淀粉。2恒温水浴是贵重仪器,没有掌握操作规程不得随便使用。
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