实验二血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
【原理】
由于不同的蛋白分子在同一环境中解离情况不同、分子大小不同等差异，电泳时可将其
分离。醋酸纤维素薄膜电泳具有分离速度快，区带清晰，操作简便等优点。血清含多种蛋白
质，用醋酸纤维素薄膜电泳可分为五个区带，经固定染色后不仅可看到清晰的色带，而且可
定量测定，计算出各种蛋白质的百分含量，其正常值如下：
A白蛋白
57～72
α1球蛋白
2～5
α2球蛋白
4～9
β球蛋白
65～12
γ球蛋白
10～20
某些肝、肾疾病上述蛋白含量发生改变。
【仪器】
电泳仪721型分光光度计染液盘漂洗盘镊子或竹夹子
【试剂】
1．巴比妥缓冲液pH86，离子强度006：巴比妥纳127g，巴比妥166g，先加水少
量，小心加热溶解，最后用蒸馏水定容为1000ml，4℃保存。
2．氨基黑10B染色液：氨基黑10B05g，甲醇50ml，冰醋酸10ml，蒸馏水40ml，混
匀。
3．漂洗液：95％乙醇45ml，冰醋酸5ml，蒸馏水50ml，按比例混匀。
4．04NNaOH溶液。
【操作】
1点样：将醋酸纤维薄膜切成8cm×2cm条状，浸于巴比妥缓冲液，待完全浸透后，取
出置于滤纸上，轻轻吸去多余的缓冲液，再于薄膜的无光泽面的一端25cm处，用小玻片蘸
取少许血清，垂直印于膜上，待样品浸入膜后，将薄膜有样品的一面向下以防蒸发干贴在
电泳槽架上，两端用数层浸湿的滤纸（或纱布）作盐桥贴紧。（其他样品同样处理，若需标
记，只能用铅笔书写于有光泽面的两端。）
2．通电：一般电压用90～120V，电流约04～06mA／cm，通电45至60分钟，待电泳
区带展开约25～35mm后关闭电源。
3．染色：通电完毕，将薄膜直接浸于染色液中，3～5分钟后取出放入另一盘中，用漂
洗液浸洗数次每次3分钟，至脱色使背景无色为止。染色完毕，将染色液倒回原瓶，漂洗
液注入回收瓶。
4．定量：将漂洗完毕的薄膜吸干，剪下每种蛋白质色带，另于空白处剪一窄条薄膜，
分别放入有4m104NNaOH的中试管内，振摇数次，使染料色泽浸出，30分钟后，分别于
650
m处读吸光度空白薄膜条浸出液作空白对照。
【计算】
吸光度总和T为各种蛋白吸光度的总和：T＝Aα1α2βγ。
分别计算每种蛋白的百分数A
白蛋白（）×100T
α1α1球蛋白（）×100
T
fα2
α2球蛋白（）
×100
T
ββ球蛋白（）×100
T
γγ球蛋白（）×100
T现在许多实验室采用光密度计定量法：待薄膜完全干燥后，浸于透明液中约5～10分钟，取出平贴在玻璃板上，完全干燥后成为透明的膜。然后在光密度计上测定吸光密度，并可绘制成曲线，r