全球旧事资料 分类
很快,也可能是色谱柱问题)。将样品稀释再进样就可以了,这是由于进样量过大,色谱柱过载造成的。
3)样品的特性
f有些样品由于其化学结构的特点,存在互变异构现象,而这种互变异构体无法分开,而是以一个动态平衡存在。在色谱分析时,在一个特定的条件下,一种物质将出现双峰,双峰靠的很近,基本齐高,不拖尾,条件稍一变化,尤其pH,双峰现象将消失,如红霉素等。有的样品紫外的色谱图上看不到双峰,但在LC-MS下,用质谱检测器,其质谱的总离子流图上较明显,例如我分析过的农药啶虫眯(吡虫清)。
4)参数记录的参数一般都内定的,不必修改,但GC和HPLC的参数是不完全一致的,例如C-R3A数据记录仪上的一般记录时间间隔GC为2ms,HPLC为5ms,如果记录间隔时间缩短,一个峰将变为二个峰或更多。5鬼峰、倒峰、未出峰
6峰裂分
f裂峰产生原因的确定样品基质复杂或分析多种样品柱污染或部分阻塞滤片流动相pH7由于硅胶溶解导致柱塌陷除非使用专门的柱子溶剂比流动相的强度大可能产生裂峰或宽峰,由样品量决定(溶剂化效应)7峰拖尾、峰展宽、峰前伸
峰拖尾原因的确定评价柱选择使用高纯度硅胶柱或不同键合技术柱评价流动相效果改变流动相pH和添加剂消除次级效应流动相中组份与柱子相互作用减小进样量消除柱外效应冲洗柱子检查柱子老化塌陷易记小卡片来了:其它常见峰异常问题汇总
fQA峰问答
进行HPLC分析时,怎样才能知道某一个色谱峰是否是单一峰呢?特别是分析中药成分的时候?标准品加入法、DAD、还有改变流动相的组成是否能说明呢?
1、多种不同原理的方法比较是首选。
2、其次采用DAD检测器进行光谱分析,如果提示不纯,估计有问题。纯度阈值受仪器、流动相等影响,所以只能作为参考。对于分子结构中差异有紫外吸收官能团的,dad检测器一般还是可以准确判断峰纯度的,但对于结构中无紫外吸收的那些差异,DAD检测器就无能为力了,比如某肽链中的氨基酸差异、或者一些对应异构体,dad也是无能为力的。
3、如果DAD不行,那么就需要采用质谱鉴别了,优选液质联用,如果是含盐流动相,可以采用收集不同时段的色谱流出物的方式,脱盐,进行质谱检测。
4、如果怀疑有异构体,这个就比较头疼了,非对应异构体需要二级(主要是对CID的能量有要求,可以打断侧链)的质谱才能判断侧链的区别。对应异构体的辨别目前好像只有waters的离子淌度质谱(没做过)有一定的分辨能力,但也不是万能r
好听全球资料 返回顶部