实验五35二硝基水杨酸比色法测定糖的含量
一：目的了解35二硝基水杨酸比色法测定糖的原理掌握总糖定量测定的操作方法
二：原理还原糖是指含自由醛基或酮基的单糖（如葡萄糖）和某些具有还原性的双糖
（如麦芽糖）。它们在碱性条件下，可变成非常活泼的烯二醇。遇氧化剂时，具有还原能力，烯二醇本身则被氧化成糖酸及其他产物。
（碱）还原糖
HCOHCOH
HCOH
H2COH
烯二醇
COOHOH
（碱）加热
OCOHHCOH
HCOH
H2COH
糖酸
COOHOH
O2N
NO2
35二硝基水杨酸（黄色）
O2N
NH2
3氨基5硝基水杨酸（棕红色）
黄色的35二硝基水杨酸（DNS）试剂与还原糖在碱性条件下共热后，自身被还原为棕红色的3氨基5硝基水杨酸。在一定范围内，反应液里棕红色的深浅与还原糖的含量成正比，在波长为540
m处测定溶液的吸光度，查对标准曲线并计算，便可求得样品中还原糖的含量。对于非还原性的双糖（如蔗糖）以及还原性很小的多糖（如淀粉），应先用酸水解法将它们彻底水解成单糖。再借助于测定还原糖的方法，可推算出总糖的含量。由于多糖水解时，在每个单糖残基上加了一分子水，因而在计算时，须扣除加入的水量，当样品里多糖含量远大于单糖含量时，则比色测定所得总糖含量应乘以
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折算系数（11809），即得比较接近实际的样品中总糖含量。
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三：实验材料及设备1、材料：面粉2、仪器：分光光度计电子天平沸水浴3、器材：
刻度试管：25mL×8容量瓶：100mL×2锥形瓶：100mL×1移液管：1mL×22mL×210mL×2烧杯：250mL×150mL×1滴管：2洗耳球：2滤纸：11cm坐标纸漏斗、洗瓶、白瓷板、试管架、移液管架、试管夹、玻棒：各1四：试剂的配制1、葡萄糖标准液（1mgmL）
预先将分析纯葡萄糖置80℃烘箱内约12小时。准确称取500mg葡萄糖于烧杯中，用蒸馏水溶解后，移至500mL容量瓶中，定容，摇匀（冰箱中4℃保存期约一星期）。若该溶液发生混浊和出现絮状物现象，则应弃之，重新配制。2、35二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）
将50g35二硝基水杨酸溶于200mL2NNaOH溶液中（不适宜用高温促溶），接着加入500mL含130g酒石酸钾钠的溶液，混匀。再加入5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解后，定容至1000mL。暗处保存备用。3、碘液称取5g碘和10g碘化钾，溶于100mL水中。4、酚酞指示剂称取01g酚酞，溶于250mL70（VV）的乙醇中。
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5、HCl溶液（6N）取500mL12NHCl，用水稀释至1000mL。
6、NaOH溶液（6N）取240gNaOH，加水溶解，定容至1000mL。
五：操作步骤1、样品中总糖的提取
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