免疫胶体金技术常见影响因素分析
自胶体金作为特殊标记物进行研究以来建立的各种免疫胶体金技术以其特异性强、灵敏度高、操作简捷等特点在医学、农牧业、环境及食品检测等领域被广泛应用。免疫胶体金技术的反应过程是一个由金颗粒、抗原与抗体动态结合的反应过程在这个过程中每个环节的好坏都直接影响试验的成败。而试验过程中每个环节又受到很多因素的影响和制约下面将影响免疫胶体金技术的因素作一分析为成功制备胶体金检测产品提供参考。
1耗材的选择
11不同型号膜的筛选。硝酸纤维素膜的型号在试验中至关重要作为反应载体影响到整个试验的成败。不同的生产厂家生产硝酸纤维素膜时使用的聚合物和表面活性剂的来源、类型和数量均大不相同对生产出的膜的性能产生较大影响膜的孔径和分布结构不同。膜孔径减小膜的实际可用表面积递增膜结合蛋白的量也递增膜孔径越小层析速度也越慢金标复合物通过T线的时间就越长反应也就越充分因此膜孔径越小灵敏度越高但是同时也减慢了跑板速度增加了非特异性结合的机会也就是假阳性越高。用于金标免疫快速试验的膜多为硝酸纤维素膜或硝酸纤维素醋酸纤维素混合膜不同的包被蛋白对膜有特定要求试验者应根据蛋白质的性质选择适合孔径大小和分布结构的膜找到合适的平衡点使胶体金的标记物在膜上的流动速率为最佳。
12结合垫的选择。结合垫位于层析系统的中间一般要求结合垫的网格均一且非特异性吸附低能很好地负载胶体金标记物和待检测样品而不被吸附玻璃纤维素膜具备以上优点同时具有一定的硬度为试验中常用。
13样品垫及吸水纸的选择。样品垫和吸水纸位于胶体金免疫层析系统的两端对于胶体金层析系统功能的实现起着举足轻重的作用。试验中应根据试纸条检测样品的性质选择合适的样品垫和吸水纸保证样品在样品垫形成的通道中快速地流动而不被非特异性地吸附或者改变样品的性质。如检测样品为血清则可选择网格较疏松的玻璃纤维素膜即可如果检测样品为毒素则可选择质量好的吸水纸和样品垫。吸水纸则要有很好的蓄水能力保证样品中所用的液体都经过膜的反应区而被样品垫吸收和蓄积。
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f2关于胶体金的制备
制备颗粒均匀、分散度好的胶体金在金标免疫快速试验中非常关键如果金颗粒直径的变异范围太大就会影响到试验的稳定性和重复性如果金颗粒的形状不规则或粒径不均一使得胶体金标记物容易解离和沉淀而产生金标扩散不完全、反应区底色过深和假阳性现象而且胶体金质量不好胶r