浓度逐渐增加到50，100，200，900mLL，从而使不同聚合度的多糖分别沉淀析出。2．2．2色谱分离法
常用两种色谱分离方法：一是凝胶柱色谱法，二是离子交换色谱法。2．2．3膜分离法
膜分离技术（membra
eseparatio
tech
ology，MST）是一种高效分离技术，分离过程以选择透过性膜作为分离介质，通过在膜两侧施加某种推动力（压力差、化学位差、电位差等），使原料液中组分有选择性的通过膜。目前应用较多的是超滤和微滤技术。3多糖的分析鉴定3．1含量的测定
测定方法：硫酸－苯酚法、硫酸－蒽酮法、比色定量法、分光光度法、纸色谱法、离子交换色谱法、yaphe法、薄层色谱法、酶法、原子吸收法、HPLC法、凝胶电泳法、亲和电泳法、连续流动分析法检测法44、次亚碘酸盐定量法、蒽酮－硫酸法（总糖）、DNS法（还原法）、磷钼比色法、邻钾苯胺比色法等。每种方法只对某些多糖的测量效果好。比色法、分光光度法、离子交换色谱法、酶法和电泳法等可同时用于多糖的定性定量分析。3．2纯度鉴定
多糖是高分子化合物，其纯品微观上是不均一的，通常所说的多糖纯品实质上是一定分子量范围的均一组分。多糖纯度鉴定的常
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f用方法：超离心、高压电泳、凝胶层析、HLPC法等。现在应用较多的是HLPC法，旋光度测定也是纯度测定的一种方法。3．3分子量的测定
多糖分子量的测定是研究多糖性质的一项重要工作。常用方法：渗透压法、蒸气压渗透剂法、端基法、粘度法、光散射法、凝胶色谱法、超过率法、沉淀法、凝胶电泳法、HPLC法、超离心分析法、分子筛色谱法、GPC法、MALDI－TOF－MS法。3．4结构测定3．4．1多糖一级结构测定
多糖的一级结构分析，主要是分析组成多糖的单糖类型、数目、连接方式及苷建构型。常用化学法和仪器分析法。多糖组分与分子比例测定法：部分酸解法、完全酶解法、色谱法；吡喃、呋喃环形式结构的分析：红外光谱；连接次序：选择性光谱法、糖苷键顺序水解、核磁共振；α－β－异头异构体：糖苷酶水解、核磁共振；羟基被取代情况：甲基化反应、气相色谱、过碘酸氧化、Smith降解法和测硫酸基法（terho法）、核磁共振、质谱法；糖链、肽链连接方式：单糖与氨基酸组成、稀碱水解法、肼解反应；多糖结构的分析方法很多，迄今没有一种方法可以单独完成多糖结构的分析。仪器分析与化学方法相结合是常用的多糖结构测定方法。3．4．2多糖高级结构测定
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f目前研究多糖的二级结构常用的手段是NMR技术，如2D－NMR，13C谱，通r