生物化学实验报告
姓
名：
学号
专业年级
组别
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量
实验日期
实验地点
合作者
指导老师
评分
教师签名
批改日期
一、实验目得
1、１、学习醋酸纤维薄膜电泳得基本原理与操作方法；1、2、了解电泳技术得一般原理；１、3、掌握电泳分离血清蛋白质及其定性定量得方法。
二、实验原理
2、1、血清中各种蛋白质得等电点不同，一般都低于pＨ７、4。它们在pH8、6得缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带得电荷量不同，在醋酸纤维素薄膜上电泳得速度也不同。因此可以将它们分离
f为清蛋白Ａlbumi
）、α1球蛋白、α2球蛋白、β－球蛋白、γ球蛋白5条区带
2、2、血清中不同蛋白质得等电点、分子量及含量
血清蛋白质
等电点
分子量
占总蛋白
得
清蛋白
4、64
６9，0０0
5772
α1－球蛋白
5、０6
2００，0０0
2～５
α2球蛋白
5、06
3０0000
4～9
β－球蛋白
5、12
９0，000～１5０，０00
6、5～１２
γ球蛋白
6、８5～7、３
1５６000950，000
122０
缓冲液ｐH8、6，ｐI＜pH
血清蛋白带负电荷在电场中向正极移动。
预测血清蛋白电泳区带图
血清蛋白依次分为清蛋白，球蛋白得α１、α2、β、γ五个区带
2、3、①膜条经过氨基黑1０B染色后显出清晰色带②各色带蛋白质含量与染料结合量基本成正比；③可将各色带剪开，分别溶于碱性溶液中；④用分光光度法计算各种蛋白质得百分数。
f三、材料与方法：
3、1、实验材料：
3、1、1、实验试剂：①样品健康人血清（新鲜、无溶血②巴比妥巴比妥钠缓
冲液（pH8、６离子强度０、０6molL）③氨基黑１0Ｂ染色液④漂洗液⑤洗脱液：
0、4molNaOH溶液。
３、１、2、实验器材：①Ｖ－１100分光光度计×1）；②恒温水浴箱×１）
③试管×6、试管架×1）；④1000μL加样枪×1、加样枪架×1⑤醋酸纤维薄
膜（2cm8ｃm厚度１20μm）；⑥培养皿×5；⑦点样器或载玻片×１）；⑧平头镊
子×2）⑨剪刀（×1）⑩电泳槽（×１；直流稳压电泳仪（×１3、2、实验步骤
1．准备与点样①取２×8cｍ得膜条；②亚光面距一端１、5ｃm处取一点样线；③
充分浸透在巴比妥缓冲液中；④取出膜条，用滤纸吸去多余得缓冲液；⑤点样器下端粘
上薄层血清⑥垂直点样。
点样示意图：
注意点样线尽量点得细窄而均匀
8cm



小组标记
点样线m
样品标记
点样区
粗面
2cm
2电泳①放置膜条（点样面向下，点样端置于r