PCR常见问题与对策分析
【摘要】PCR（多聚酶链式反应polymerasechai
reactio
）是从20世纪80年代发展的体外核算扩增技术。PCR技术可以说是生物工程、生物医学领域的一项具有创时代意义的程碑，它具有简便、快速、重复性好、产率高、敏感、特也等诸多突出的优点，本文针对一些有关PCR技术中常见问题进行了分析。
【关键词】PCR技术；常见问题；问题分析【中图分类号】Q503【文献标识码】A【文章编号】10050019（2014）03055902关于核算的研究已经有一百多年的历史了，20世纪60年代末开始，人们便致力于研究基因体外分的技术，在1985年Mullis等人发明了聚合酶链反应，其原理是在试管中给DNA的体外合成提供了适合复制的条件，与DNA的体内复制很相似。但Mullis所使用的Kle
ow酶不耐高温，90摄氏度时会变性失活。直到1988年，SaKi等人从嗜热杆菌中提取了一种耐高温的DNA聚合酶才得以解决这一问题。在PCR技术被人们广泛使用过程中，也出现了很多见或少见的问题，笔者对此类问题进行了总结及归纳，并给出了相应的对策。
f1片状带或涂抹带在PCR扩增时偶尔会出现片状带、涂抹带或地毯样带等现象。原因有可能是dNTP的浓度太高，，Mg2的浓度太高，循环次数太多或者脱货温度太低等引起的；也可能是模板降解时，所使用的酶的质量太差或是酶的使用量过多所引起的。出现此类问题时一般解决方法为：可以适当的降低dNTP的浓度和Mg2浓度、减少循环次数、升高退火温度、更换模板或增加模板量、减少酶使用量等。2扩增条带PCR扩增的关键环节有很多，其中包括模板DNA的特性、酶的活性及质量、引物的特异性与质量、PCR扩增时的反应条件等，不出现条状带时应该对上述环节进行针对性分析。（1）模板的来源不同，则在反应时所使用的量也会不同，模板的质和量不同，则反应效果有可能不同，如当真核基因组DNA作为模板时，所使用的模板量应该比原核的多。模板的纯度也会对PCR扩增有一定的影响，如含有Taq或杂蛋白时会影响反应的效率。（2）引物的质量、浓度、两条引物浓度是否相同是相影响PCR扩增时常见原因之一。（3）由于Taq酶容易被污染或失活，也会影响反应PCR的反应效果
f（4）PCR产物的电泳检测时，最好为当日检测且一般不要超过48h，超过48h后会出现带形不规则，甚至消失等现象。3非特异性扩增带PCR扩增后所出现的条带跟预计时的大小不同，或同时出现多个特异性扩增带或非特异性条带等，此类现象的发生可能以下几种可能。第一种是引物与靶序列没有完r