丙型肝炎病毒（HCV）核酸定量检测标准操作规程（PCR荧光探针法）
丙型肝炎病毒（HCV）核酸定量检测标准操作规程（PCR荧光探针法）
1目的：规范HCVRNA（PCR）检测操作流程，保证检测结果的准确性。2应用范围：HCVRNA荧光定量检测。3职责31文件编写：实验室技术员。32文件审核：实验室主管。33文件审批：实验室主任。34执行：PCR实验室所有工作人员。4参考文献：41中山大学达安基因股份有限公司丙型肝炎病毒核酸检测试剂盒（PCR荧光探针法）说明书。42中山大学达安基因股份有限公司核酸扩增荧光检测系统DA7600型使用说明书。5内容：51检测方法：PCR荧光探针法52实验原理：用一对丙型肝炎病毒特异性引物和一条丙型肝炎病毒特异性荧光探针，配以逆转录液、逆转录酶、PCR反应液、耐热DNA聚合酶（Taq酶）、四种核苷酸单体（dNTPs）等成分，先将RNA逆转录成cDNA，再通过PCR体外扩增法，即高温变性、低温退火、适温延伸进行DNA扩增，并对PCR
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全过程进行实时监测从而检测丙型肝炎病毒RNA。主要用于HCV病毒感染的辅助诊断及其疗效监测的标准。
53性能参数：531精密度：检测下限为10x103copiesml。532线性范围：10x103～10x108copiesml。54标本采集：541使用标本类型：血清。542标本采集：由合作单位按照以下要求进行采集，采集后及时分离出血清在2～8℃条件下保存。用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2ml，注入无菌的干燥玻璃管，室温（22～25℃）放置30～60mi
，全血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500rpm离心5mi
；吸取上层血清，转移至15ml灭菌离心管。543标本保存和运送：分离后的血清在2～8℃条件下保存应不超过72小时，20℃可保存1个月，要长期保存的需分装后储存于70℃。应避免反复冻融。标本运送采用0℃冰壶。544标本拒收标准：污染、严重溶血、脂血类或肝素抗凝剂标本。55设备和试剂：551设备：DA7600荧光定量PCR仪、低速水平离心机、生物安全柜、台式高速离心机、移液器、混匀器、干式恒温器、冰箱（4℃、20℃）、移动固定紫外灯、冷冻离心机。552试剂：
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5521试剂品牌：中山大学达安基因股份有限公司丙型肝炎病毒核酸检测试剂盒（PCR荧光探针法）
5522试剂批准文号：国药准字2014第3400033号。5523试剂组成：
组分名称
规格
数量主要成分
RNA提取液A
200μL管
1
二氧化硅、DEPC水
核酸提取试RNA提r