MTT实验
原理；步骤；注意事项；
一、原理
MTT全称为345dimethylthiahiazozy135diphe
ytetrazoliumromide，汉语化学名为34，5二甲基噻唑22，5二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formaza
）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490
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波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。MTT溶液的配制方法：通常，此法中的MTT浓度为5mgml。因此，可以称取MTT05克，溶于100ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用022μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT吸光度最好在007范围内。MTT一般最好现用现配，过滤后4ordmC避光保存两周内有效，或配制成5mgml保存在20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
MTT有致癌性，用的时候小心有条件最好带那种透明的簿膜手套配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系，毕竟时间较短，或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉配制MTT时用PBS（ph74）溶解。PBS配方：Nacl8g＋Kcl02g＋Na2HPO4144g＋KH2PO4024g调pH74定容1L。
二、几种MTT法实验步骤
普通MTT法实验步骤：
1：接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔100010000个细胞（细胞浓度的问题见后面的注意事项）接种到96孔板，每孔体积200ul2培养细胞：同一般r