。注意：孵育时需注意在周围用浸足水的纸或药棉等保持湿润，以尽量减少TUNEL检测液的蒸发。cPBS或HBSS洗涤3次。d用抗荧光淬灭封片液封片后荧光显微镜下观察。可以使用的激发波长范围为450500
m，发射波长范围为515565
m绿色荧光。TUNEL检测对于悬浮细胞或细胞悬液a用PBS或HBSS洗涤2次。b加入50μlTUNEL检测液，37℃避光孵育60分钟。cPBS或HBSS洗涤2次。d用250500μlPBS或HBSS悬浮。e此时可以用流式细胞仪进行检测或涂片后在荧光显微镜下观察。可以使用的激发波长范围为450500
m，发射波长范围为515565
m绿色荧光。
TUNEL检测常见问题TUNEL检测出现非特异性荧光标记a有些细胞或组织，例如平滑肌细胞或组织，
uclease或polymerase的酶活性水平较高，易导致出现非特异性的荧光标记。解决方法是，取细胞或组织后立即固定并且要充分固定，以阻止这些酶导致假阳性。b使用了不适当的固定液，例如一些酸性固定液，导致出现假阳性。建议采用推荐的固定液。cTUNEL检测反应时间过长，或TUNEL检测反应过程中反应液渗漏，细胞或组织表面不能保持湿润，也可能出现非特异性荧光。注意控制反应时间，并确保TUNEL检测反应液能很好地覆盖样品。TUNEL检测荧光背景很高a支原体污染。请使用支原体染色检测试剂盒检测是否为支原体污染。b高速分裂和增殖的细胞，有时也会出现细胞核中的DNA断裂。cTUNEL反应过强。可以用试剂盒提供的TdT酶稀释液稀释TdT酶25倍后再按照说明书操作。稀释后的TdT酶需当日使用。d红细胞中血红蛋白导致的自发荧光产生严重干扰。此时宜选择其它细胞凋亡检测试剂盒。TUNEL检测标记效率低a使用乙醇或甲醇固定会导致标记的效率较低。
fb固定时间过长，导致交联程度过高。此时宜减少固定时间。c荧光淬灭。Fluoresce
ce在普通光照10分钟就会严重淬灭。解决方法是需注意避光操作。d碘化丙啶双染时，如果碘化丙啶染色过深会导致观察到的本试剂盒的TUNEL染色效果减弱。碘化丙啶可以接受fluorescei
激发产生的荧光，从而起到淬灭作用。解决方法是用较低浓度的碘化丙啶染色，例如05μgml碘化丙啶。
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