茚三酮比色测定氨基酸含量
一、实验原理氨基酸在碱性溶液中能与茚三酮作用，生成蓝紫色或黄色化合物（除脯氨酸
外均有此反应），可用吸光光度法测定。生成的蓝紫色或黄色化合物颜色深浅与氨基酸含量成正比，其最大吸收波长分别为570
m或350
m，故据此可以测定样品中氨基酸含量。二、实验试剂
（1）12茚三酮溶液：称取茚三酮1g于盛有35mL热水的烧杯中使其溶解，加入40mg氯化亚锡（S
Cl2H2O），搅拌过滤（作防腐剂）。滤液置冷暗处过夜，加水至50mL，摇匀备用。
（2）pH804磷酸缓冲液：Ⅰ、准确称取磷酸二氢钾（KH2PO4）45350g于烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转入500mL容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀备用。Ⅱ、准确称取磷酸氢二钠（Na2HPO4）119380g于烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转入500mL容量瓶中，用水稀释到标线，摇匀备用。Ⅲ、取上述配好的磷酸二氢钾溶液100mL与190mL磷酸氢二钠溶液混合均匀即为pH804的磷酸缓冲溶液。（3）氨基酸标准溶液：准确称取干燥的氨基酸（如异亮氨酸）02000g于烧杯中，先用少量水溶解后，定量转入100mL容量瓶中，用水稀释到标线，摇匀，准确吸取此液100mL于100mL容量瓶中，加水到标线，摇匀，此为200μgmL氨基酸标准溶液。三、实验方法及步骤（1）标准曲线绘制准确吸取200μgmL的氨基酸标准溶液00、05、10、15、20、25、30mL（相当于0、100、200、300、400、500、600μg氨基酸），分别置于25mL容量瓶或比色管中，各加水补充至容积为40mL，然后加入茚三酮溶液（20gL）和磷酸盐缓冲溶液（pH为804）各1mL，混合均匀，于90℃水浴上加热至显色恒定为止（该加热过程至少需要25分钟），取出迅速冷至室温，加水至标线，摇匀。静置15mi
后，若生成蓝紫色化合物，在570
m波长下，以试剂空白为
f参比液测定其余各溶液的吸光度A；若生成的化合物呈黄色，则在350
m波长下，以试剂空白为参比液测定其余各溶液的吸光度A。以氨基酸的微克数为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线。
070y0000935x0002679
060
050
光度值A
040
030
020
010
0000
100200300400500600700氨基酸含量μg
图1350
m波长下氨基酸与吸光度线性关系图（雷恩，2016）
（2）提取样品
称取1020g植物样品（新鲜样或干样），加5mL10醋酸，在研钵中研碎，
用水洗移入100mL容量瓶，水定容，过滤到三角瓶中，取滤液测定。该样品提
取液可继续用来测定可溶性蛋白质含量（考马斯亮蓝G250法）
（3）样品测定
吸取澄清的样品溶液4mL，按标准曲线制作步骤，在相同条件r