因扩增与前c区基因P扩增先用引物1S1引物2作PCR扩增Sl各1510Bur3DNTP2TaqE08反应总体积为31循环参数94℃300s预变性94℃30s55℃45s72℃30s共循环35圈72℃延伸420s1232前C区基因PCR扩增引物3S3引物49sd各15其余成分不变循环参数94℃60os预变性94℃3os5530s72℃6os共循环35圈72℃延伸420s1233前c区扩增产物的酶切BS614UBsA021O
f作者单位017000内蒙古鄂尔多斯市第二人民医院Bur22014混匀后每份分装16取PCR2扩增产物437℃水浴1hYMDD扩增产物的酶切Apa1l35U份1OBur2U1BSA02014或sSp14u10Bur2014混匀后每份分装16取PCR扩增产物437℃水浴1h酶切产物经30Act由亚甲基双丙烯酰胺和丙烯酰胺配制电泳1h溴化乙淀染色51Or
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紫外线分析仪上观察电泳条带2结果21变异株的鉴定ⅥDD出现171bNA条带为野毒株l49bpDNA条带为变异株YVDD出现315bpDNA条带为野毒株283bpDNA条带为变异株前C区基因出现110bpDNA条带为野毒株bpDNA条带为变异株22敏感性对不同HBVDNA含量的血清标本进行巢式PCR扩增可检测到含量为103拷贝mI的样本表明巢式PCR具有较高的敏感性23方法的重复性以上标本20例进行2次检测结果均能重复2450倒检测样本结果单纯YVDD变异的23例46ⅥDD变异的22例44前c区基因变异的1O例加YVDD与ⅥDD同时变异的18例36YVDD合并前c区变异的5例
f10Y1DD合并前c区变异的5例10三者同时变异的4例8加例阴性对照者检测的三项变异指标均为阴性3讨论近年来发现HBV可出现多种变异可使HBV感染后HBV感染标志物不典型变异后可加重病情或出现耐药或免疫逃疫现象给诊断和治疗及预防造成困难因而HBV变异的研究对了解发病机理病理判断诊断治疗及预后均有关系31前c区变异由于AA28的变异使HBe艟不能产生或合成障碍而c蛋白仍能产生患者表现为血清HBsAg抗一HBe及HBVDNA阳性HBeAg阴性常表现为进展性肝病及肝功能衰竭32P区基因变异P区编码DNA聚合酶对HBV复制起重要作用此区发生突变则可能导致HBV复制改变或阻断近年来抗HBV药物核苷类似物拉米夫定等的应用亦发现HBV变异拉米夫定是一种非常强的抗病毒药物其主要作用靶HBV聚合酶为其作用的主区分为ABcDE5个活性区其中ABc为三磷酸核苷结合的催化位点BE区可能参与RNA模板和启动子定位C区包括YMW基因域为酶催化的活性部位其中在逆转录病毒最多的变异是YM叻中的M变异如YVDD或Ⅵ叻文献报道MDO变异最早可发生在治疗后2周
820中华临床新医学Chi
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