乙型肝炎病毒基因检测方法研究
中华临床新医学ck
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e2005年第5卷第9期819临床研究乙型肝炎病毒基因检测方法研究杨建林薛宝莲【中圈分类号】1262【文献标识码】B【文章编号】168o一98662O05一o9081902摘要目的建立简便准确实用的检测乙型肝炎病毒HBv基因变异的方法方法根据HBV基因序列用巢式聚合酶链反应
estPCR分别扩增HBVP基因B区和前c区片段产物用ApauSSP1U361酶切30Acr胶电泳分析酶切产物片段长度建立检测P基因与前c基因变异的方法对5O例慢性乙型肝炎慢乙肝患者检测YMDD和前c区基因序列变异结果所建的
estedPCR方法操作简便快速结果准确经济成本低灵敏度高可检测到103拷贝mI的HBVDNA50例慢乙肝患者中单纯YMDD变异的32例合并前c变异的4例20例健康体检者血清作为阴性对照结论本方法简便准确适合较大样本检测可用于临床常见拉米夫定耐药性HBvP基因变异与前C区基因变异的筛检关键词乙型肝炎病毒变异基因变异基因检测
f为建立简便准确实用的检测乙型肝炎病毒基因变异的方法笔者根据其基因序列用巢式聚合酶链反应的方法分别扩增其B区和前c区片断分析其酶切产物片断长度并用此方法对5o例慢性乙肝患者进行检测结果证实本方法简便准确灵敏度高适合较大样本检测报告如下1对象和方法11血清标本来源所有标本均来自我院就诊的患者男32例女18例年龄1646岁用拉米夫定6个月一3a变异基因的血清标本均一加℃保存变异基因的阳性血清标本来自北京佑安医院肝病研究所12试剂来源及方法乙肝五项试剂来源于上海荣盛生物技术有限公司用酶联免疫法检测珊VDNA试剂来源于深圳市匹基生物工程股份有限公司用荧光定量分析法检测变异基因患者在未用拉米夫定时检测一次乙肝五项和哪VDNA如抗一HBeHBVDNA阳性HBeAg阴性的标本和HBVDNA阳阳符合用拉米夫定的开始用拉米夫定治疗不定期检测HBVDNA如HBVDNA由治疗前的阳性治疗后由阴性转变为阳性选择后一次的阳性标本如治疗后玎BvDNA一直仍阳性选择治疗前与治疗后最后一次阳性标本121试剂来源所有试剂均由北京佑安医院肝病研究所提供122PCR所用引物序列见表1
f衰1PCR所用引物序列引物SlS2s4引物序列5一ⅡCCC顷CCC一35一CATC兀’G兀口rAC】1AC】1G一35一GrrAAATcTATACCCAAAGC一35一GqVGCACTCAGTCCGTrI℃TC一3123变异基因检测万法1O血清加5O裂解液95℃汽浴15r
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