叶绿素a和b含量的测定分光光度法
实验14叶绿素a和b含量的测定分光光度法
一、目的学会Chla、b含量的测定方法了解叶片中Chla、b的含量。
二、材料用具及仪器药品菠菜叶片、721分光光度计、天平、研钵、剪刀、容量瓶25ml）、漏斗、滤纸、乙醇（95）
三、原理叶绿素a、b在波长方面的最大吸收峰位于665
m和649
m，同时在该波长时叶绿素a、b的比吸收系数
K为已知我们即可以根据LambertBeer定律列出浓度C与光密度D之间的关系式：D66583。31Ca18。60Cb……………………………（1）D64924。54Ca44。24Cb……………………………。（2）1）2式中的D665、D649为叶绿素溶液在波长665
m和649
m时的光密度。为叶绿素a、b的浓度、单位为每升克数。82。04、927为叶绿素a、b在、在波长665
m时的比吸收系数16。75、456为叶绿素a、b在、在波长649
m时的比吸收系数。解方程式（1）（2，则得CA137D6655。76D649………………………3）CB25。8D6497。6D665………………………4）GCACB610D66520。04D649………（5此时，G为总叶绿素浓度，CA、CB为叶绿素a、b浓度，单位为每升毫克利用上面（3）4）（5）式即
可以计算叶绿素a、b及总叶绿素的总含量。
四、方法步骤1．称取01克新鲜叶片，剪碎，放在研钵中，加入乙醇10ml共研磨成匀浆再加5ml乙醇，过滤，最
后将滤液用乙醇定容到25ml。2．取一光径为1cm的比色杯，注入上述的叶绿素乙醇溶液，另加乙醇注入另一同样规格的比色杯中，
作为对照，在721分光光度计下分别以665
m和649
m波长测出该色素液的光密度。计算结果：
叶绿素a含量（mgg
FW）
C
A

251000

102
叶绿素
b
含量（mgg。FW）
CB

251000

102
叶绿素总量（mgg。FWG251100002
五、实验报告计算所测植物材料的叶绿素含量。
六、思考题测定叶绿素a、b含量为什么要选用红光的波长
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