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体积为V0,层析洗脱死体积为VS,介质质量为m,单位质量介质的吸附量为qm穿透液体积为VT,穿透液平均浓度为CT,则有:
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fC0V0CTVTmqm
进而,可计算出介质最终的吸附密度:
qmC0V0CTVTm
(1)
吸附回收率R1为
R1C0V0CTVT100C0V0
(2)
不同洗脱溶液的解吸附效果不同,若洗脱过程穿透液的平均浓度为CX,体积为VX,则此时的洗脱回收率R2为:
R2CXVX100C0V0CTVT
(3)
层析分离操作的总收率R3为:
R3CXVX100C0V0
(4)
4蛋白含量的测定在无其他杂质干扰的情况下,蛋白质含量可采用紫外光吸收法进行定量,绝大部分蛋白质对280
m紫外光有明显的吸收,通过测定样品的吸光度与标准曲线比对,即可确定样品中的蛋白含量。三、实验装置实验装置包括恒流泵、层析柱、上样瓶、收集瓶及连接管路组成。操作状态下,样品瓶中的样品沿连接管路被恒流泵输送到层析柱,由层析柱上端进入介质床层,再由层析柱下端流出至收集瓶。实验操作过程中应当防止气泡进入层析柱,切换上样样品时需停泵,尽量避免气泡进入管路,否则,气体易滞留于介质床层中,影响液固间物质传递。四、实验步骤1层析柱准备首先,称取2g强碱性大孔树脂,装入层析柱;然后,连接好管线,开泵向层析柱内输入去离子水,排出输入管线中的气体;调节层析柱上端转接头排出介质柱床中的气体,使转接头下缘紧贴介质床层上沿,旋紧密封旋钮,固定转接头;最后,依次用1molL的NaCl溶液和去离子水冲洗层析柱10分钟,停泵待用。
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f2流量标定调节恒流泵以一定转速操作,用一预先称重的锥形瓶收集层析柱出口流出的去离子水,收集过程计时5分钟,收集结束后再次称量锥形瓶重量,通过前后差重与收集时间计算泵的流量。重复测定两次,取平均值,即得恒流泵在该转速下的平均输送流量。通过上述方法,调节泵的转速,使得输出流量QV2mLmi
。3动态吸附含量及回收率测定【上样样品溶液】浓度为1mgmL、2mgmL、3mgmL的BSA溶液【冲洗液】去离子水【洗脱液】01molL、03molL、05molL、075molL的NaCl溶液【再生液】1molL的NaCl溶液【上样时间】5mi
、10mi
、15mi
、20mi
【操作流量】QV2mLmi
用去离子水平衡层析柱10分钟;上样10分钟,冲洗10分钟,收集上样和冲洗过程的穿透液;用洗脱液洗脱15分钟,收集洗脱过程的穿透液;再生层析柱10分钟。按照上述操作步骤,换不同浓度的上样样品、不同的上样时间、不同解吸液进行测试,通过紫外吸收测定穿透液中的蛋白含量,计算动态吸附r
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