大鼠脑组织石蜡切片的免疫组化染色体会【摘要】脑组织石蜡切片的染色结果，易出现切片染色不清楚，脱片、假阳性，假阴性出现。免疫组化这些结果的出现，与组织固定，抗原修复，内源性过氧化物酶活性的灭活，抗体质量，显色试剂质量，苏木素质量，时间上的把握及技术人员熟练程度有关，得出了免疫组化的过程的很多细节及各个步骤的主要的注意事项，提高脑组织切片的免疫组化染色操作技术。【关键词】脑组织；石蜡切片；免疫组化；染色随着免疫组化技术广泛应用于科学和医学各个领域的研究和诊断中，免疫组化的技术已经成为一种基本的检测技术，如何提高免疫组化的技术，特别是脑组织切片在免疫组化中的检测，是每一个科研人员在检测中最关心的问题，现将近几个月大鼠脑组织切片的免疫组化技术的一些体会和细节概况如下：1脑组织固定体会用4的多聚甲醛固定，固定之前要保持脑组织的平整和完整，不能被挤压，以免影响细胞的形态，影响电镜下观察。2脑组织防脱片的处理（1）传统的防脱片的处理方法有延长烤片的时间、提高烤片的温度和重新脱水［2］。免疫组化前，切片在5860℃的恒温箱中烤224h［1］，在脱蜡和脱水过程中，把切片稍晾干后再行下一步的免疫组化过程。但不能进行高温烤片，在干燥的条件下加热切片可
f以加速组织中抗原的氧化而破坏组织中的抗原［2］。（2）玻片进行化学试剂处理玻片为充分洗净干燥的磨砂防脱载
玻片。可以选用免疫组织化学染色中常用防脱片剂即多聚l赖氨酸polyllysi
e对载玻片进行处理，处理后载玻片不易脱片。
3抗原修复（1）少数抗体可以选择酶消化法如原位末端标记法（tu
el）试剂盒中以蛋白酶k为消化酶，在这过程中，注意蛋白酶k的浓度不能过高，过程中不能超过10mi
，以免修复太过出现假阴性，且bps洗涤要彻底。（2）热修复注意事项。高压加柠檬酸盐ph60缓冲液修复，时间为5分钟，冷却后连续修复2次。水浴锅修复时水温为95℃，修复时间为15～60mi
。须等缓冲液冷却至室温才能把切片取出，取切片时防烫伤。4内源性过氧化物酶活性的灭活3h2o2孵育时间一般8～10mi
，时间过长易造成结果假阴性的出现。用bps充分冲洗三次每次3mi
，注意保证bps的ph值在72～76。5滴加抗体和孵育时间（1）试剂储存时间过长会影响抗体的有效价所以试验前检查试剂是否在有效期内并及时调整储存。一般抗体储存在20℃的冰箱内，一抗是即配即用，根据说明书上一抗的浓度比例做预示实验，
f一般是15011001150，1200进r