纤维素分解菌筛选及保存
一、采样
到放牧或放养牲畜的草地上或者树林里，采集牲畜粪便周围的表皮土壤腐殖质多份，以不超过15cm深为宜。
二、样品预处理
用无菌水将样品充分溶解，静置沉淀，取上清，再稀释到合适倍数。
三、初筛
1、初筛培养基配备（gL）、Na2HPO440，KH2PO420，NaCl05，NH4NO305，MgSO47H2O，酵母膏，FeS04，CaCl2，CuSO4少许。2、在16mm×160mm试管中装初筛培养基5mL，再放入60mm×10mm的滤、纸条一张，使其紧靠于试管内壁并靠近试管底部，上端露出10mm左右，将初筛培养基高压蒸气灭菌115大气压20分钟后取出，待降温至35℃左右无菌操作下接入lmL样品，置于30℃摇床里振荡培养，每个样品做3组。观察滤纸崩溃情况，滤纸崩溃速度快、崩溃程度高的试管内含有降解纤维素的菌株多。3、取含有纤维素分解菌多的样品继续做传代培养，即将上步中滤纸崩溃程、度高的样品菌株作为样品，再重复2的实验步骤，观察是否传代稳定，选取其中传代稳定的菌株作为分离对象。
四、分离
1、分离培养基配备gL、KH2PO420，NH42SO414，MgSO7H2O03，CaC1203，FeSO47H2O0005，M
SO400016，Z
SO400017，CoC120002，琼脂20，纤维素粉10，蒸馏水1000ml，自然pH，压力105Kgcm2，灭菌20mi
。2、平板分离、无菌条件下，使用上述培养基于培养皿中进行平板划线分离操作，来接种初筛中获得的传代稳定的纤维素分解菌株，获得一系列单个菌落，再挑取单菌落重复平板划线操作，直至获得纯培养。纯培养的证实是将获得菌株作片在显微镜下观察，若菌株形态相同，则表明己分纯，否则仍为混菌，则需进一步分纯。
五、复筛
1、复筛培养基配备（gL）、纤维素粉75，KH2PO420，NH22S0414，MgSO7H2O03，CaC1203，尿素03，蛋白胨05，FeSO47H2O0005，M
SO400016，Z
SO400017，CoC120002，蒸馏水1000ml，自然pH，压力105Kgcm2，灭菌20mi
。2、将分离所得的菌株接种于复筛培养基中，30℃摇床培养150rmi
，以生、物量OD520值和还原糖产量为指标进行复筛，每隔24小时测生物量及还原糖
f含量，生物量大且还原糖产量高的菌株为所选菌株。
六、菌株鉴定
细菌依据《伯杰手册》（第八版）鉴定，真菌依据《真菌鉴定手册》鉴定。
七、实验条件优化
根据菌株种类查阅文献，确定正交实验因素，通过单因素实验，确定正交实验因素水平，通过正交实验确定所得菌株的最优培养条件。
八、酶活测定
取在最优条件下培养16小时的菌液在4℃、5000rmi
的条件下离心30mi
，收集上清液20mL，加入10ml01M的醋酸钠缓冲溶液（pH46）取此粗r