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人前列腺素E2(PGE2)ELISA试剂盒分析检测说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:
48T
25
gL800
gL
使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本前列腺素E2(PGE2)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人前列腺素E2(PGE2)水平。用纯化的人前列腺素E2(PGE2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入前列腺素E2(PGE2),再与HRP标记的前列腺素E2(PGE2)抗体结合,形成抗体抗原酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的前列腺素E2(PGE2)呈正相关。用酶标仪在450
m波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人前列腺素E2(PGE2)浓度。
试剂盒组成120倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7
2酶标试剂
3ml×1瓶8
3酶标包被板
4样品稀释液5显色剂A液6显色剂B液
12孔×4条9
3ml×1瓶103ml×1瓶113ml×1瓶12
终止液标准品(1600
gL)
标准品稀释液
说明书封板膜密封袋
3ml×1瓶05ml×1瓶15ml×1瓶1份2张1个
标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试
管中进行稀释。
800
gL
5号标准品
150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
400
gL
4号标准品
150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
200
gLl3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标
f准品稀释液
100
gL
2号标准品
150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
50
gL
1号标准品
150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相
同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品
孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5
倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后
弃去,如此重复5次,拍干。
6加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7温育:操作同3。
8洗涤:操作同5。
9显色:r
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