对照试验,做2个平皿。注意:
①吸管尖端不要触及瓶口或试管口外部,也不得触及管内稀释液。②吸管插入检样液内取样稀释时,插入深度要达25cm以上调整时应使管尖与容器内壁紧贴。③进行稀释时,应使吸管内的液体沿管壁小心流加入,以免增加检液。④每递增稀释一次,即换用一支1ml灭菌吸管。
f(三)、倒平板
稀释液移入平皿后,应及时将凉至46℃的营养琼脂培养基(放置于46℃水浴保温)倾注入平皿约15ml,并转动平皿使混合均匀。注意:
①培养基不能触及平皿口边沿,加入培养基后可正反两个方向旋转,但不可用力过度,以免溅起触及上盖。
②检样从开始稀释到倾注最后一个平皿,所用时间不宜超过20mi
。
(四)、培养
待琼胶凝固后,翻转平皿,置36±1℃温箱内培养48h后取出,立即计算平皿内菌落数
目,乘以稀释倍数,即得每克(每毫升)样品所含菌落总数。
注意:
(1)琼脂凝固后,就立即将平板放入培养箱内进行培养,以免细菌蔓延生长。
(2)如果把不能立即计数,要将平板放入0~4℃冰箱中,但不能超过24h。
不同产品菌落总数测定的培养时间:
肉、乳、蛋及制品:
37℃培养48h
水产品:
30℃培养48h:
清凉饮料、调味品、糕点、果脯、酒类等:37℃培养24h
五、结果报告
1、平皿菌落数的选择
(1)选取菌落数在30~300之间的平板作为菌落总数测定标准。每一个稀释度应采用
两个平皿,大于300的可记为多不可计。
(2)其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平
板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均
匀,则可以计算半个平板后乘以2,以代表一个平板的菌落数。
(3)当平板上有链状菌落生长时,如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限,则应作
为一个菌落计,如存在有几条不同来源的链,则每条链均应按一个菌落计算,不要把链
上生长的每一个菌落分开计数。
2、菌落总数的计算
(1)若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平
f均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每g(mL)中菌落总数结果。(2)若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,按如下公式计算:N∑C(
101
2)d…………(1式中:N—样品中菌落数;∑C—平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和;
l—第一个适宜稀释度平板数;
2—第二个适宜稀释度平板数;d—稀释因子(第一稀释度)。(3)若所有稀释度的平板菌落数均300,则取最高稀释度r