实验一食品中细菌总数的检验
一、实验目的要求
1、了解细菌总数检验的意义。2、掌握样品稀释处理的方法和菌落总数计数的方法3、掌握国标法测定菌落总数的方法和技能4、熟练无菌操作技术。
二、原理
菌落总数是指食品经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1ml检样中所含细菌菌落总数。菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
三、试剂和仪器
（一）最先准备的器材（清洗、烘干、包扎、灭菌）
规格名称
数量
1、500ml广口瓶
1个
2、500ml三角瓶
1个
3、250ml三角瓶
2个
4、18×180mm试管
3支
5、1ml移液管
5支
6、直径为90mm平皿10套
7、250ml量筒
1支
8、玻璃珠：直径约5mm
用途稀释样品配制生理盐水配制营养琼脂稀释样品
倒营养平板
（二）应灭菌、消毒的器材
剪刀1把不锈钢药匙1把称量纸：适量酒精消毒的器材：吸耳球1个，滴管胶头4只，开瓶器
f（三）应制备的培养基
1、085NaCl生理盐水2、平板计数琼脂（PCA）培养基：
培养基总量1瓶300ml瓶2瓶100ml瓶
所用容器500ml三角瓶250ml三角瓶
四、实验内容
（一）、基本操作过程：
样品称量→→样品稀释→→倾注平皿→→培养48小时→→计数报告。
（二）、样品的稀释（样品的处理）
样品：袋装乳粉外包装消毒→→无菌称样品25g→→加无菌生理盐水→→加盖振荡摇均匀1、用75酒精棉球擦拭消毒袋口，用无菌剪刀开封取样。称取检样25g，放入装有适量玻璃珠的灭菌广口瓶子中，然后用225mL温热的灭菌生理盐水徐徐加入（先加入少量生理盐水将乳粉调成糊状，再全部加入，以免奶粉结团），采用振摇法（用力快速振摇50次振幅不小于40cm）振摇均匀，即为110的稀释液。固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以800010000rmi
的速度处理1mi
，制成1：10的均匀稀释液。2、用1ml灭菌吸管，吸取1∶10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内，振摇试管混合均匀，制成1∶100稀释液。3、另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用另一支1ml灭菌吸管。4、根据对检样污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的稀释液1ml于灭菌平皿内，每个稀释度做2个平皿。5、用1ml生理盐水作空白r