实验报告
实验课程：仪器分析学生姓名：学号：专业班级：化学（创新）1301实验名称：紫外分光光度法测定蛋白质含量
f一、实验目的
学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术掌握TU1901紫外可见分光光度计的使用方法并了解此仪器的主要构造。
二、实验原理
紫外可见吸收光谱法又称紫外可见分光光度法它是研究分子吸收190
m～750
m波长范围内的吸收光谱，是以溶液中物质分子对光的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析方法。紫外可见吸收光谱的产生是由于分子的外层价电子跃迁的结果，其吸收光谱为分子光谱，是带光谱。
形成原理：在有机化合物分子中有形成单键的σ电子、有形成双键的π电子、有未成键的孤对
电子。当分子吸收一定能量的辐射能时，这些电子就会跃迁到较高的能级，此时电子所占的轨道称为反键轨道，而这种电子跃迁同内部的结构有密切的关系。
在紫外吸收光谱中，电子的跃迁有σ→σ、
→σ、π→π和
→π四种类型，各种跃迁类型所需要的能量依下列次序减小：σ→σ
→σπ→π
→π由于一般紫外可见分光光度计只能提供190～850
m范围的单色光，因此，我们只能测量
→σ的跃迁，
→π跃迁和部分π→π跃迁的吸收，而对只能产生200
m以下吸收的σ→σ的跃迁则无法测量。定性分析利用紫外可见吸收光谱法进行定性分析一般采用光谱比较法。即将未知纯化合物的吸收光谱特征，如吸收峰的数目、位置、相对强度以及吸收峰的形状与已知纯化合物的吸收光谱进行比较。定量分析紫外可见吸收光谱法进行定量分析的依据是朗伯比尔定律：AlgI0Iεbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比，即物质在一定波长处的吸光度与它的浓度成线形关系。因此，通过测定溶液对一定波长入射光的吸光度，就可求出溶液中物质浓度和含量。由于最大吸收波长λmax处的摩尔吸收系数最大，通常都是测量λmax的吸光度，以获得最大灵敏度。光度分析时，分别将空白溶液和待测溶液装入厚度为b的两个吸收池中，让一束一定波长的平行单色光分别照射空白和待测溶液，以通过空白溶液的透光强度为I0，通过待测溶液的透光强度为I，根据上式，由仪器直接给出I0与I之比的对数值即吸光度。紫外可见分光光度计紫外可见吸收光谱法所采用的仪器称为分光光度计，它的主要部件有五个部分组成，即
f光源
单色器I0吸收池I检测器
信号显示器
由光源发出的复合r