．标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）：12μmolL（5号标准品）120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液6μmolL（4号标准品）120μl的5号标准品加入120μl的标准品稀释液3μmolL（3号标准品）120μl的4号标准品加入120μl的标准品稀释液15μmolL（2号标准品）120μl的3号标准品加入120μl的标准品稀释液075μmol（1号标准品）120μl的2号标准品加入120μl的标准品稀释液
L
2．分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入稀释好的标准品50μl；在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。轻轻晃动混匀，37℃温育30分钟。3．弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。4．每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。轻轻晃动混匀，37℃温育30分钟。5．弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。6．每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。7．取出酶标板，每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。8．测定：以空白孔调零，在450
m波长下测量各孔的吸光度值（OD值）测定应在加。终止液后15分钟以内进行。9．根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的，其实际浓度应该乘以总稀释倍数。
f操作程序总结：
准备试剂，样品和标准品
加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟
洗板5次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟
洗板5次，加入显色液A、B，37℃显色10分钟
加入终止液
15分钟之内读OD值
计算检测范围：05μmolL→15μmolL规格：96T盒保存：28℃有效期：6个月（28℃）。
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