细胞传代次数太多后会影响细胞的形态及功能,将不利于进行细胞实验。同时,如果在传代过程中,培养的细胞太多时,可将多余细胞置于液氮中进行长期冻存,为后续实验备存足够细胞。
f四、细胞计数
实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中的细胞的数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。细胞计数(1)先用巴氏管将细胞悬液混匀(2)将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间,静置3mi
,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。用枪吸取54ul细胞悬液放在一片塑料纸上。(3)再吸取6ul台盼蓝染色液混入吸出的细胞悬液中。(4)用枪头混匀混合液(5)准备好细胞计数板,酒精棉球擦拭一遍。吸10ul细胞悬液沿盖玻片吹入,冲入池中,注意不要冲到两边的沟里。(6)用20倍的显微镜计数,计数原则数上不数下,数左不数右。(7)稀释倍数计算605411(8)计数公式(4个大方格细胞总数4)×104×稀释倍数(11)个ml(9)说明:公式中除以4,因为计数了4个大格的细胞数。公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为:10mm(长)×10mm(宽)×01mm(高)01mm3而1ml1000mm3
f(10)注意:镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞
计算,若细胞团10以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液)
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