月亮县中医院检验科
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免疫SOP手册
文件编号：YCXZYYJYK_SOP_13页码：第1页，共5页版本：第3版，第1次修订生效日期：20180101
SOP_131酶联免疫吸附试验（ELISA）基本原理与注意事项
一、基本原理
1、包被
11、固相载体的要求（1）、结合抗体或抗原的容量大（2）、抗体或抗原牢固地固定在其表面（3）、不影响免疫反应性（4）、利于反应充分进行（5）、固相方法简便易行，快速经济12、固相载体的材料：聚笨乙烯
13、包被coati
g将抗原或抗体结合于固相载体。14、封闭blocki
g用1～5的牛血清白蛋白或5～20小牛血清消除固相载体表面未结合的位点，消除非特异性吸附。
2、反应
加入待测抗体或抗原和酶标抗原或抗体。标记酶的要求：1、活性高2、性质稳定3、专一性强4、酶催化底物的显色信号易于判断和测量5、方法敏感，重复性好，简单易行6、酶的底物易于配制保存，酶及底物价廉常用酶辣根过氧化物酶HRP（ELISA中应用最为广泛的标记用酶）
编写者：张三三时间：20180101审核者：李四四时间：20180101批准者：李四四时间：20180101
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3、洗涤
使结合在固相上的抗原抗体复合物与未结合的分离。
4、底物显色
HRPDH2H2O2→D2H2OH2O2为受氢体，HRP对受氢体的专一性很高。供氢体DH2习惯上被称为底物，底物有多种。常用底物：四甲基联苯胺TMB四甲基联苯胺TMB是ELISA中应用最广泛的底物。TMB反应后显蓝色，加酸终止反应后变为黄色测定波长450
m，稳定，无致癌性。
二、常用方法与原理
1、双抗体夹心法
方法：用已知抗体包被，加入待检血清，再加酶标抗体，加底物显色应用：二价或二价以上的较大分子抗原测定乙型肝炎表面抗原、甲胎蛋白、HCG等
2、双抗原夹心法
原理：类似双抗体夹心法操作步骤：类似双抗体夹心法应用：乙型肝炎表面抗体
编写者：张三三时间：20180101
审核者：李四四时间：20180101
批准者：李四四时间：20180101
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3、竞争法（测抗原）
方法：用已知抗体包被，加入待测血清，再加酶标抗原，酶标抗原与待检物竞争与包被物结合。加底物显色。应用：用于只有一个抗原决定簇的小分子半抗原（药物、激素等）
4、竞争法（测抗体）
原理：类似检测抗原的竞争r