doserespo
securvewasobservedforNPCo
clusio
Ourdetectio
systembasedo
ERCPCRstrategyisase
sitivesimplea
drapidtoolforthedetectio
ofEDCs
基金项目：国家高技术研究发展计划863项目No2006AA06Z421SupportedbytheNatio
alHighTech
ologyResearcha
dDevelopme
tProgramofChi
a863Program2006AA06Z421作者简介：谭文婷（1983），女，湖北利川人，研究实习员。电话：134，Email：ta
we
ti
g1983126com通讯作者：邓国宏，电话：0238020，Email：ghde
gs
photmailcom收稿日期：
fKeywordsE
docri
edisrupti
gcompou
dsestroge
receptorsαestroge
respo
seeleme
t随着工业污染加剧，环境内分泌干扰物（E
docri
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ds，EDCs）成为继工业革命带来的煤烟污染及汽车工业带来的光化学烟雾污染之后的第三代环境污染物，将对人类健康产生严重影响。目前，各国多以GC和GCMS法作为检测EDCs的标准方法。但由于EDCs通常以痕量混合物的形式存在，且环境中存在着大量化合物，截止到2009年10月17日，在化学文摘社（ChemicalAbstractsService，CAS）登记的化学物达50659223种1，面对如此多的化合物，传统的试验方法已无法满足需求，所以必须探索高通量筛选方法。1998年美国美国环保局（USEPA）推出的《环境内分泌干扰物筛检程序》2，Gaido等3建立的环境雌激素酵母测评体系，李剑等4建立的酵母双杂交体系，Kim等5制备的EDCs阵列玻片筛选技术，都是基于高通量的设想，但仍然存在周期长、细胞培养的不稳定性等局限。经典的雌激素受体信号传导理论认为，内源性雌激素通过与雌激素受体α（estroge
receptorα，ERα）中的配体结合域结合后，受体发生变构而形成二聚体，从而暴露DNA结合区，使特异的DNA序列即雌激素效应元件estroge
respo
seeleme
ts，ERE与之结合，刺激靶基因转录，从而表现出各种生理效应6。在ERα活化和DNA结合过程中，ERα的磷酸化起着十分重要的作用，Ar
old等78研究证实，537位酪氨酸（Tyr537）磷酸化位点是ERα的基本磷酸化位点，其重要作用是调控ERα的二聚体化，同时也是雌激素依赖的丝氨酸高度磷酸化以及ERα结合DNA的前提条件；而167位丝氨酸167（Ser）磷酸化是雌激素依赖的。环境雌激素（即EDCs）是以与内源雌激素类似的形式与ERα结合并和内源雌激素一样主要通过ERα介导而产生相应的生理效应。根据此分子作用机制，本研究探索了基于ERα激活效应的ERCPCR定量检测体系，以检测和评估雌激素效应，为环境激素污染的检测和应用提供一种灵敏、快捷、高通量方法。
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材料与方法
11主要试剂17β雌二醇（17βestradiol，E2）、雌酮（er