基于ERCPCR的环境内分泌干扰物检测体系研究
谭文婷，罗霄，晏泽辉，但芸婕，毛青，邓国宏第三军医大学西南医院全军感染病研究所重庆市400038
提要：目的利用雌激素与ERα间基于配体受体激活效应的生物学原理和探针的定量PCR扩增以两条含雌激素反应
实时荧光检测技术，建立痕量环境内分泌干扰物（EDCs）的快速检测体系。方法
元件（ERE）并与ERα有高亲和力的DNA序列，COX7RPERE和VitA2ERE，作为结合探针，进行ERα体外受体配体特异结合，形成配体ERDNA探针复合体（ERC），荧光定量检测ERE含量，并考察17β雌二醇（E2）、雌酮（E1）、已烯雌酚DES、邻苯二甲酸二甲酯（DMP）及壬基酚（NP）的结合情况。结果与VitA2ERE相比，人源性COX7RPERE在ERα体外受体配体结合过程中具有更好的结合效应；E1、E2、DES、DMP四种雌激素类化合物对COX7RPERE的结合存在明显的剂量效应关系，其对COX7RPERE结合效应的半数有效浓度（EC50）分别为089
molL、199pmolL、079
molL、631pmolL，而NP无明显的剂量效应曲线。结论关键词检测体系中结合探针的结合量存在明显的雌激素剂量依赖性，这种基于ERα激活效应的ERCPCR定量检测体系可以用于监测化合物和EDCs的类雌激素活性。内分泌干扰物；雌激素受体；雌激素反应元件；荧光定量PCR
中图法分类
Studyo
a
ERCPCRbaseddetectio
systemfore
viro
me
tale
docri
edisrupti
gcompou
ds
TANWe
ti
gLUOXiaoYa
ZehuiDANYu
jieMAOQi
gDENGGuoho
g（I
stitutio
ofI
fectiousDiseasesSouthwestHospitalThirdMilitaryMedicalU
iversityCho
gqi
g400038Chi
a）AbstractObjectiveTodeveloparapida
dhighthroughputscree
i
gsystemofe
viro
me
talestroge
si
vitrobasedo
theestroge
depe
de
tbi
di
gofestroge
receptorsαERαwithestroge
respo
seeleme
tERECOX7RPge
ea
dVitA2ge
epromoterMethodsChoosetwoDNAseque
cesCOX7RPa
dVitA2ge
epromoterwhichwithhighaffi
ityEREtotheERαascombi
atio
probestomeasuretheestroge
icco
ce
tratio
i
theestroge
depe
de
tERαEREbi
di
gprocessThecombi
atio
probewasdetectedbyrealtimefluoresce
tqua
titativePCRFivecompou
ds17βestradiolE2estro
eE1diethylstilbestrolDESdimethylphthalateDMPa
d
o
ylphe
olNPatthefi
alco
ce
tratio
of1014to106molLweredetectedbytheprese
tmethodResultsComparedwiththeVitA2EREhuma
derivedCOX7RPEREhadabettercombi
atio
withtheprobeduri
gestroge
depe
de
tERαEREbi
di
gprocessi
vitroOurprese
tdetectio
systemprovidedse
sitiveestroge
depe
de
tdoserespo
securvesforE1E2DESa
dDMPwithmedia
effectiveco
ce
tratio
EC50at089
molL199pmolL079
molLa
d631pmolLrespectivelyHowever
oobviousr