生物化学实验报告
姓名：学号：专业年级：组别：
生物化学与分子生物学实验教学中心
f实验名称质粒DNA的提取、定量与酶切鉴定
实验日期20141211
实验地点第4实验室
合作者
指导老师
评分
教师签名
批改日期
一、实验目的
1掌握PCR基因扩增的原理和操作方法2掌握碱裂解法提取质粒的方法3了解紫外吸收法检测DNA浓度与纯度的原理、方法4学习水平式琼脂糖凝胶电泳操作
二、实验原理
（一）、第一部分聚合酶链式反应1PCR（PolymeraseChai
Reactio
）即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以DNA为模板，特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，在体外复制DNA的过程。
1加热使模板DNA，在高温下90℃95变性，双链解链；2降低溶液温度，使合成引物在低温（35－70℃一般低于模板Tm值的5℃
左右），与模板DNA互补退火形成部分双链；3溶液反应温度升至中温72℃，在Taq酶作用下，以dNTP为原料，引物为
复制起点，模板DNA的一条单链在解链和退火之后延伸为一条双链。（二）、第二部分质粒DNA提取与定量1质粒（Plasmid）
1独立于细菌染色体外，能独立自主复制的闭合环状DNA分子；
f2存在于细菌，放线菌，真菌以及一些动植物细胞中，在细菌细胞中最多。2碱裂解法、
1基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异；2高碱性条件下，染色体DNA和质粒DNA变性；3当以高盐缓冲液调节其pH值至中性时，变性的质粒DNA复性并保存在溶
液中，染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心形成沉沉淀去除。3离心层析柱1硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，不吸附蛋白质、多糖等物质；2通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除；3低盐，高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。4紫外光吸收法1物质在光的照射下会产生对光的吸收效应；2而且物质对光的吸收是具有选择性的；3各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱。4因此不同波长的单色光通过溶液时其光的能量就会被不同程度的吸收，光能量被吸收的程度和物质的浓度有一定的比例关系。（三）、第三部分酶切鉴定1限制性内切酶1限制性内切酶（restrictio
e
do
uclease）是DNA操作过程中所使用的基本工具；2特异性地结合于一段被称为限制酶识别序列的特殊DNA序列之内或其附近的特异位点上，并在此切割双链DNA；
f3分子克隆中常用的为II类限制酶，其识别位点长度为4、5或6个核苷酸的
反向重复序列。
（四）、第四部分琼脂糖凝r