四川大学实验报告
题目：质粒DNA的提取及检测
一．实验目的
1学习碱裂解法提取质粒的原理和方法；2学习DNA琼脂糖凝胶电泳的原理和方法。
二．实验原理
1质粒Plasmid：
一种染色体外的稳定遗传因子，大小从1200kb不等，为双链、闭环的DNA分子，并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，常常编码一些对宿主有利的酶的基因，这些基因的表型包括抗生素抗性，产生抗生素、限制酶、修饰酶等。
2载体Vector：
要把一个有用的外源基因通过基因工程手段，转化到细胞中去进行繁殖和表达，需要运载工具，携带外源基因进入受体细胞的这种工具就叫载体。目前除了大肠杆菌中的质粒、λ噬菌体、M13噬菌体、噬菌粒外，还有酵母人工染色体载体以及动、植物病毒载体等。
3分离质粒DNA：
（1）培养细菌使质粒扩增；（2）收集和碱裂解细菌；（3）分离和纯化质粒DNA。
4碱裂解法
（1）溶液Ⅰ：50mmolL葡萄糖，10mmolEDTANa，25mmolLTrisHClpH80作用：分散细胞，螯合金属离子使酶失活，防止DNA的降解（2）溶液Ⅱ：04molLNaOH，2SDS，临用前1：1配制作用：细胞在NaOH和SDS溶液中裂解时，蛋白质与染色体DNA发生变性
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（3）溶液Ⅲ：5molL醋酸钾60ml，冰醋酸115ml，双蒸水285ml作用：酸性条件上质粒DNA复性，留在上清液。大肠杆菌DNA和蛋白质SDS复合物等发生沉淀。
5电泳
带电荷的物质，在电场中的趋向运动称为电泳。DNA的琼脂糖凝胶电泳可以分离长度为200bp至近50kb的DNA分子。DNA的迁移率（U）的对数与凝胶浓度（T）之间存在反平行线性关系。因此，要有效地分离不同大小的DNA片段，选用适当的琼脂糖凝胶浓度是非常重要的。
6提取质粒
在质粒提取的过程中，由于操作原因，提取的质粒可能有三种：线性DNA、开环DNA、闭环超螺旋DNA。当提取的质粒DNA电泳时同一质粒DNA泳动速度：闭环超螺旋〉线状〉开环。但有时也有也会出现相反情况，因为与琼脂糖浓度、电流强度、离子强度及核酸染料含量有关。
三．实验材料及设备
1实验材料：
（1）含质粒pUC18大肠杆菌，15ml塑料离心管，EP管架，微量取液器和取液器吸头，常用玻璃器皿（如三角瓶、量筒、试剂瓶等）；
（2）提取的pUC18，琼脂糖，锥形瓶，一次性手套，胶铲，封口膜，剪刀，取液器吸头。实验设备：
2实验仪器：
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（1）恒温摇床，高压灭菌锅，超净工作台，10、100、1000μL取液器各一支，台式高速离心机，制冰机，漩涡器；（2）电泳仪，电泳槽，样品槽模r