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1022)试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。MUC5AC基因原位杂交(BSH0083F)、MUC5AC兔抗大鼠一抗(bs7166R)试剂盒购自北京博奥森生物技术有限公司。测定大鼠TNFα(CKE30635R)、IL8(CKE30583R)、sICAM1(CKE30457R)、IL17(CKE30480R)和CRP(CKE30459R)等,ELISA试剂盒均为RDSystems产品。(2)动物分组、COPD大鼠模型制备与给药方法1112①分组:50只大鼠,雌雄各半,随机分为正常对照组、COPD模型组、爱罗咳喘宁低、中、高剂量组,共5组,每组10只。②模型制备:烟雾加LPS制备COPD大鼠模型。第1、14天,麻醉后仰卧位固定,18号静脉套管针快速插入气管,用注射器注入LPS200μL(每毫升生理盐水含LPS1mg),将大鼠固定板旋转,使LPS均匀分布于两肺。第2~28天(除第14天)将大鼠箱内熏香烟烟雾,2次d,40mi
次(8支烟次),休息1d周;对正常组无特殊处理,第1、14天经气管注入200μL生理盐水。③给药:经肺功能和组织病理检测,判定模型成功后,正常组、模型组灌胃蒸馏水(15mLkg),各治疗组给予爱罗咳喘宁低、中、高剂量(775、1552、3104)gkg分别灌胃,1次d,连续14d。
2结果
21整合知识
整合了COPD中西医基础知识模块(图1~2)。基于病因及发病机制的治疗,有了科学依据。
22实验结果
本课题组基于COPD的病因及发病机制,拟定爱罗咳喘宁方。结果发现:(1)爱罗咳喘宁能改善COPD大鼠肺通气和换气功能。(2)爱罗咳喘宁有抗氧化损伤作用。(3)爱罗咳喘宁有抗炎症作用。(4)爱罗咳喘宁通过调整AQP5和MUC5AC基因表达,控制气道黏液高分泌,从而化痰止咳,为中医药治疗COPD提供实验依据,为开发治疗COPD的新药提供新的思路、治疗靶点及有效方药。
23人才培养
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5名硕士学会了制备COPD大鼠模型、检测肺功能、血气指标、气管和肺组织取材、分离血清、制备支气管肺泡灌洗液的方法,能熟练操作ELISA法、放射免疫法、炎细胞分类及计数、常规制片等基本实验过程,同时掌握了组织病理观察、免疫组化、原位杂交、Wester
blot、RTPCR等涉及组织、细胞、分子生物学现代科研技术,理解了COPD发病机制与氧化损伤(SOD、GSHPx、MDA)、炎症因子(sICAM1、IL8、TNFα、IL17和CRP)、pP38MAPK信号传导有关,气道黏液高分泌与AQP5、MUC5AC基因在肺组织原位异常表达有关,在此过程中全面提升他们科研设计、实施与科研管理的能力。
3讨论
COPD是常见的以气道不完全可逆性气流受限为特征的慢性炎症性疾病,其主要病因包括感染、空气污染、过敏、抵抗力降r
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