板（梳子），有机玻璃内槽，水平仪，取液器，微波炉，凝胶成像系统。
3实验试剂：
（1）质粒的提取aLB培养液胰蛋白胨（Trypto
e）10g，酵母提取物（Yeastextract）5g，NaCl5g，琼脂（固体培养基）15g，用1NNaOH调pH75b溶液Ⅰ，溶液Ⅱ，溶液Ⅲ；c氨苄青霉素50mgmL；d抽提液（饱和酚：氯仿：异戊醇25241）作用：氯仿可使蛋白质变性，有助于液相与有机相的分离。平衡酚密度大，可是DNA在上清中。异戊醇防止抽提液起泡。e无水乙醇作用：除去DNA水化层，使DNA沉淀。f70乙醇作用：纯化质粒DNA。gTE缓冲液或ddH2O作用：溶解DNA
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f四川大学实验报告
（2）DNA琼脂糖凝胶电泳检测
aGoldview（DNA染料）
b1×TAE缓冲液
c上样缓冲液（6×）
四．实验方法及步骤
1质粒DNA的提取
a将带有质粒pUC18的大肠杆菌接种在液体培养基中（加氨苄青霉素50μgmL），370C培养过夜；
b取培养菌液15mL置Eppe
dorf小管中，10000rpm×2mi
，弃上清液；
c加入100μL溶液I，漩涡器上充分混匀，在室温下放置10mi
；d加入200μL新配制的溶液Ⅱ，轻轻翻转23次，使之混匀，冰
上放置5mi
；e加入150μL冰冷的溶液Ⅲ，盖紧后，温和颠倒35次使混匀，
产生白色絮状物，冰上放置15mi
；f10000rpm×5mi
，取上清液于另一干净的离心管中；g向上清液中加入等体积（约400μL）酚：氯仿异戊醇（25：241，
vv），振荡混匀，10000rpm×10mi
，将上清液转移至新的离心管中；
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f四川大学实验报告
h加入等体积（约370μL）氯仿异戊醇（241），混匀，10000rpm×2mi
取上清液于新离心管中；
i向上清液加入2倍体积无水乙醇，混匀，200C放置1h；j12000rpm×5mi
，倒去上清液，吸干液体；k加800μL70乙醇，离心12000rpm×1mi
，倒尽上清液，吸
水纸吸干液体，室温自然干燥30mi
，直至变得透明无乙醇味；l加20μLddH2O，混匀使DNA溶解完全，取5μL做电泳检测，
剩余的溶液放置200C保存备用。2DNA琼脂糖凝胶电泳检测a琼脂糖凝胶板的制备b称取03g琼脂糖，置于锥形瓶中，加入30mL1×TAE缓冲液，微
波炉加热直至琼脂糖溶解c待胶液冷却到650C（不烫手为宜），加入1μLGoldview混匀，
搅拌器上搅拌排除气泡，缓慢倒入事先准备的制胶有机玻璃槽（插入样品槽模板梳子）内静置30mi
左右，轻轻晃动拔出梳子3加样
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f四川大学实验报告
胶板放入电泳槽中（样品孔位于负极），注入1×TAE缓冲液淹没过胶板5mm，用取液器将提取的质粒DNA5μL与1μL上样缓冲液（6×）混匀，加入胶板的样品小槽内。4电泳将电泳槽与电泳仪接通，r