斥力,导致溶解度的降低。另外,有机溶剂与水作用,能破坏蛋白质的水化膜,故蛋白质在一定浓度的有机溶液中便沉淀析出。在分离纯化的过程中,往往需要几种方法的合理结合,方法选择的好,前后串联得当,可大大提高整个分离提纯过程的速度和收效。
在分离提纯过程中,应该尽量避免引起蛋白质变性的各种因素,此外,在分离提纯前,必须建立对酶的分析鉴定方法,以正确指导分离提纯地进行。
材料与方法
1材料啤酒酵母(兰州黄河啤酒有限公司)
2.方法及步骤21葡萄糖浓度标准曲线的制作:
取22支编号的试管(两个平行)按下表的顺序加入02Glc溶液,水及35二硝基水杨酸试剂。然后在沸水浴中加热5分钟,然后立即用自来水冷却并用蒸馏水定容至25ml,摇匀,于540
m测光密度,结果如下表所示:
f管号含糖量02Glc水(ml)35二
OD540
m
平均
(ug)BG标准液
硝基水
OD540
m
溶液(ml)
杨酸试
剂(ml)
1
00
00
20
15
00
00
00
2
04
02
18
15
006500730069
3
08
04
16
15
015301670160
4
12
06
14
15
025701850221
5
16
08
12
15
034603340340
6
20
10
10
15
044304290436
7
24
12
08
15
050805060507
8
28
14
06
15
059406020598
9
32
16
04
15
066906580664
10
36
18
02
15
076607530760
11
40
20
00
15
085008180834
22标准蛋白曲线的制作
取11支编号的试管,分别准确加入如下表所示的牛血清白蛋白溶液,然后
分别加入15ml考马斯亮蓝G250蛋白染色试剂,摇匀,放置3mi
后,在595
m
比色读取OD值,结果如下表所示:
试管号01
2
3
4
5
6
7
8
9
10
标准蛋白020
406080100120140160180200
浓度
(ugml)
牛血清白001020304050607080910
蛋白标准
液(ml)
水(ml)100908070605040302010
考马斯亮1515151515151515151515
蓝G250
f蛋白染色试剂(ml)OD595
m000018005401240188023103080340043305800705
000015003801350186021903650344048205760601平均0000165004601290187022503360342045705780653OD595
m23转化酶的纯化231粗品的制备和乙醇分级沉淀2311自溶
用台秤称取40g的新鲜啤酒酵母放在250毫升三角瓶中,再分别放入12克乙酸钠细粉末、20毫升甲苯。然后在35℃水浴中间隔片刻震荡、保温30分钟,此时会观察到菌体自溶现象。2332抽提及粗酶的制备
往上述自溶液中加入60毫升水,于35℃保温过夜。第二天,将自溶液于4000RPM15mi
离心。取出离心管后分三层:下层透明,中间为蛋白层,上层为有机层。用r