蔗糖酶的提取、分离、纯化及活性检测
摘要
随着分子生物学的发展，不论对酶分子本身作用机制的研究还是其他研究，越来越需要纯度更高的酶制剂，这就要求我们熟悉酶提纯的一般操作步骤及酶的提纯及活力测定等重要的生物实验技术。本次实验主要通过提取啤酒酵母中的蔗糖酶并经过两次纯化测定其活力与Km。在实验过程中用乙醇分级分离法，DEAECellulose柱层析，分子筛（凝胶过滤）层析提取纯化蔗糖酶。在实验过程中，虽然我们很努力但由于我们对实验的程序不熟悉，因此在实验的一些过程中有一些明显的操作失误，使得实验的最后测定结果与理论值有一定出入。
关键词
啤酒酵母蔗糖酶乙醇分级分离DEAECellulose柱层析分子筛层析Km
前言
生物体内所发生的一切化学反应，几乎都是在专一性酶的催化下进行的，因此酶的研究对了解生命活动的规律以及生命本质的阐述具有十分重要的意义。随着分子生物学的发展，不论对酶分子本身作用机制的研究以及分子生物学其他重要课题的研究都越来越多地需要使用作用专一，纯度高的酶制剂。这就要求人们建立各种方法，以便从各种生物来源的材料中分离提纯酶。
由于酶本身也是蛋白质，因此酶分离提存的方法大体上与蛋白质纯化方法相同，一般来说，没有一种固定的方法，而往往根据实验者所要分离提纯酶的取材以及酶本身的物理化学及生物学性质来确定分离提纯方法。各种酶的纯化通常有五个阶段：①材料的选择与预处理；②细胞破碎；③抽提；④纯化；⑤浓缩干燥及保存。
酶分离纯化成功与否的重要标志：一是要有较高的收率；二是达到所要求的纯度，这两个指标通常是矛盾的，可根据需要来有所侧重，一般来说，好的方法
f与步骤应该是简单易行，最终的酶制剂有较高的收率和纯度。就单独的每种分离提纯的方法而言，有盐析法、有机溶剂分级法、调PH分
级沉淀法、选择变性法、吸附法、层析法（纸层析、薄板层析、柱层析等）。其中盐析法是用于蛋白质和酶分离提纯的最早而且最广泛的一种方法，该方法是根据蛋白质和酶在一定浓度的溶液中溶解度的降低程度的不同而达到彼此分离的方法盐析法常用的中性盐有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等，其中用得最多的是硫酸铵，因为它具有温度系数小而溶解度大的优点。在一定的溶解度范围内许多蛋白质和酶均可盐析出来。其次，它的价格便宜，分级效果好且不容易引起蛋白质变性，在一定程度上还有稳定作用。有机溶剂沉淀法能降低溶液的介电常数，从而增加蛋白质分子上不同电荷的r